Modulación de las propiedades biocatalíticas de lipasas microbianas mediante la síntesis de agregados enzimaticos entrecruzados (cleas)

Abstract

Las lipasas de Cándida antarctica B (Cal-B) y Thermomyces lanuginosus (TLL) fueron inmovilizadas en soportes de octil agarosa y posteriormente modificadas por reacciones de aminación y succinilación en fase sólida. El efecto de la modificación química fue evaluado sobre las propiedades de actividad y estabilidad de la Cal-B y la TLL, hallándose que la aminación química permitió un incremento del 10 y 13% en la actividad de la Cal-B y la TLL, respectivamente. La aminación química mejoró notablemente la estabilidad de la TLL en la medida que el grado de modificación fue incrementado. Sin embargo, este tipo de modificación causó un efecto irrelevante sobre la propiedad de estabilidad de la Cal-B. Por su parte, la succinilación química provocó una marcada reducción en la actividad de las lipasas en estudio. Las lipasas modificadas por reacciones de aminación, fueron utilizadas para la preparación de agregados enzimáticos entrecruzados (CLEAs). La síntesis de CLEAs ocurre a través de dos pasos: un paso de precipitación seguido de un paso de entrecruzamiento. Aunque la precipitación puede alcanzarse mediante el uso de diferentes agentes precipitantes, el paso de entrecruzamiento se ha convertido en un problema debido a la baja cantidad de residuos de Lys presentes en la superficie de las lipasas. El enriquecimiento con grupos amino mediante reacciones de aminación con etilendiamina facilitó el entrecruzamiento proteico, dando lugar a dos nuevos biocatalizadores que fueron finalmente utilizados en la resolución cinética del R/S-Propanolol.