Anti human papillomavirus antibody detection using rhodamine b labeled l1-hpv-16 derived peptides

Abstract

Las infecciones persistentes por virus del papiloma humano de alto riesgo se asocian con el desarrollo de cáncer de cuello uterino. Existe evidencia de que la infección por VPH genera anticuerpos séricos, asociados con el desarrollo natural de la infección por VPH. La detección de anticuerpos contra el VPH está relacionada con el riesgo de desarrollar lesiones cervicales asociadas a la infección y a la generación de respuesta inmune protectora después de la vacunación. Este trabajo se realizó para determinar si es posible o no, detectar diferencias en la respuesta de anticuerpos anti-HPV entre mujeres vacunadas con HPV (PC) y no vacunadas (NC) usando péptidos derivados de L1 marcados con rodamina y técnicas no convencionales. Se encontró que estos péptidos presentaban una reactividad más alta con anticuerpos de los sueros de PC-mujeres que con anticuerpos de los sueros de NC-mujeres con p<0,0001. Seis de los once péptidos derivados de tres regiones L1fueron reconocidos específicamente por anticuerpos presentes en sueros de mujeres vacunadas con VPH como se detectó mediante ELISA. El Péptido P-BC en el ensayo de fluorescencia de puntos, mostró la mayor reactividad específica para sueros de PC, lo que sugiere que este péptido podría usarse para detectar cambios en la respuesta de anticuerpos contra el VPH con esta técnica. En el ensayo de polarización de fluorescencia se encontraron más moléculas de unión en sueros de PC que en sueros de CN para los péptidos P-BC y P-H4(406-423), la mayoría de ellos anticuerpos según los resultados de ELISA y probablemente generados por la inmunización con VLPs. Además, había moléculas de unión con mayor afinidad por los péptidos P-BC(50:64) y P-FG(271: 286) en sueros PC que en sueros NC. Estos cuatro péptidos discriminaron entre sueros de PC y sueros NC utilizando las constantes de disociación (kd) y Bmax.