Immobilization of lipases on glyoxyl-octyl supports: improved stability and reactivation strategies

Abstract

Las lipasas candida rugosa (CRL) y candida antárctica (isoforma a) (CAL A) se han inmovilizado con éxito sobre el soporte heterofuncional octil glioxil agarosa (OCGLX) en comparación con el soporte octil agarosa (OC) y glioxil agarosa (GLX). La inmovilización sobre OCGLX permitió obtener hiperactivaciones similares a las encontradas sobre los soportes OC, aunque la incubación a pH 10.0 durante 4 h disminuyó la actividad de ambas enzimas a un 25%. Después de la reducción, más del 95% de la actividad de la enzima se unió covalentemente al soporte. La fracción no unida covalentemente se desorbió por lavado con detergente. Estos biocatalizadores fueron más estables que sus homólogos inmovilizados sobre OC en las inactivaciones térmicas y en solventes orgánicos. Aún más interesante es que la inmovilización irreversible permite la reactivación de los biocatalizadores de CAL A inactivados por incubación en solvente orgánico, después del desplegamiento de la enzima en presencia con guanidina y de replegamiento en tampón fosfato de potasio (alrededor del 55% de la actividad logró ser recuperada durante 3 ciclos sucesivos de desplegamiento/replegamiento). Por su parte GLXCAL A permitió recuperar el 75% de la actividad, pero la estabilidad térmica y la actividad fue mucho más baja, además esta estrategia no se pudo aplicar a CRL. Ni la enzima inmovilizada sobre bromuro de cianógeno ni sobre OCGLX exhibió actividad significativa después de utilizar las estrategias de despliegamiento/replegamiento.