Desarrollo de un método colorimétrico para determinar la hidrólisis enantioselectiva del mandelato de metilo utilizando derivados de lipasa de cándida rugosa(CRL)

Abstract

Las lipasas son enzimas que se caracterizan por su amplia especificidad para diferentes sustratos y una elevada regioselectividad y enantioselectividad. Por esta razón, estas enzimas han sido estudiadas en química fina para diferentes reacciones de biotransformación, tales como la resolución cinética de las mezclas racémicas. En este trabajo, se evaluó el efecto de inmovilización covalente de la lipasa de Candida rugosa (CRL) en soportes epóxido puro (EC) y epóxido-modificado con etilendiamina (EDA), ácido iminodiacético (IDA) y quelatos de cobre (IDA-Cu). Los derivados de la enzima fueron probados en la resolución cinética del éster metílico del ácido (R/S)-2-fenil-2-hidroxiacético (mandelato de metilo). La hidrólisis enantioselectiva de este sustrato se determinó por medidas colorimétricas para llevar a cabo un screening de diferentes derivados en una metodología de alto rendimiento. Para este fin, se utilizaron los indicadores de pH azul de bromotimol (ABT) y rojo fenol (RF) para la determinación de la actividad y enantioselectivad de los diferentes derivados de lipasas sobre los enantiómeros (R y S) del mandelato de metilo, utilizando espectrofometría UV-Visible. Mediante esta técnica, se demostró que todos los biocatalizadores fueron selectivos para el enantiómero S de mandelato de metilo. La mejor relación enantiomérica (E = 16) y el exceso enantiomérico (ee = 74,4%) se obtuvo para la CRL inmovilizada en EC-IDA. Los resultados obtenidos en esta tesis confirmaron que el uso de diferentes protocolos de inmovilización constituye una poderosa herramienta para modular las propiedades biocatalíticas de lipasas microbianas.