Attribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)Florez Escobar, Alvaro MauricioSuarez Barrera, Miguel Orlando2024-03-0320162024-03-0320162016https://noesis.uis.edu.co/handle/20.500.14071/35215Bacillus thuringiensis es utilizado como controlador biológico debido a las propiedades de las toxinas que produce. Las Cry11 han demostrado tener actividad tóxica contra Aedes aegypti. A partir de una librería obtenida de barajado de ADN de los genes cry11Aa, cry11Ba y cry11Bb, se analizaron cinco variantes: 1, 8, 23, 79 y 81; mediante una aproximación racional, se generaron A92D y C157R a partir de dos mutaciones en el dominio I de la toxina Cry11Bb. Con el objetivo de determinar actividad tóxica contra A. aegypti, las variantes se expresaron en la cepa acristálifera de Bt BMB171 y se comparó frente a los controles Cry11Aa y Cry11Bb. Los resultados indican que las variantes presentaron altos porcentajes de similitud e identidad con cry11Aa y además, inserciones, deleciones y mutaciones puntuales a lo largo de las secuencias. Todas las variantes presentaron deleciones en el amino terminal del Dominio I, la región que codifica para el Dominio II fue la más conservada, mientras que la que codifica para el Dominio III presentó el mayor número de sustituciones. La variante 79 fue la más variable (20%) y la 23 presentó una identidad del 99% con respecto a la parental. La 23 y 81 disminuyeron la actividad tóxica 6.9 y 11.6 veces respectivamente, la 1 y 79, mantuvieron una toxicidad similar a Cry11Aa. La 8 aumentó su toxicidad en 3,8 veces más que Cry11Bb y 6 veces más que Cry11Aa. La A92D redujo la toxicidad en 13,7 veces y C157R no presentó actividad detectada (>500ng/ml). Los resultados evidencian la importancia de estas mutaciones en los dominios II y III relacionados con la actividad tóxica de Cry11Aa contra A. aegypti, así como la conservación A92D y C157R en Cry11Bb. Esta información es importante en el diseño de proteínas Cry11 para el control de vectores.application/pdfspahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/Bacillus ThuringiensisBarajado De AdnAedes AegyptiCry11Mutagénesis Sitio DirigidaConcentración Letal Media (Cl50).Universidad Industrial de SantanderTesis/Trabajo de grado - Monografía - MaestriaUniversidad Industrial de Santanderhttps://noesis.uis.edu.coBacillus thuringiensis is used as biological control due to the bio insecticide properties based on their toxins. Among theseCry11 toxins have shown toxic activity against Aedes aegypti. From a DNA shuffling library obtained by recombination between cry11Aacry11Ba and cry11Bb genesfive variants: 182379 and 81 were analyzed. Additionallytwo point mutations in the region encoding for domain I from Cry11Bb were generated obtaining two variantsA92D and C157R. In order to determine if these variants exhibit toxic activity towards A. aegyptithey were expressed in acrystaliferous Bt strain (BMB171) and compared their toxic activity against parental proteins Cry11Aa and Cry11Bb. The results indicate that five variants showed high similarity and identity with cry11Aa geneand insertionsdeletions and point mutations throughout the sequences were also found. All variants showed deletions in the region encoding N-terminal for domain I. The region encoding for domain II was less variable whereas the region coding for domain IIIshowed a highest number of substitutions. Variant 79 was the most variable and 23 was the less with respect to Cry11Aa. Variants 23 and 81 reduced the toxic activity in 6.9 and 11.6 timesrespectively. Variants 1 and 79maintained a similar toxicity compared to Cry11Aa. Interestinglythe variant 8 increased toxicity in 3.8 times more than Cry11Bb and 6 times more than Cry11Aa. Moreoverthe variant A92D decreased toxic activity 13.7 times and C157R variant did not present detected activity (>500 ng/ ml). The results obtained in this study demonstrate the importance of these mutations in domains II and III of the toxins Cry11Aa as well as the conservation of A92D y C157R from Cry11Bb in their possible role in toxic activity against A. aegypti. The information is valuable for design of new Cry11 toxins for vector control.info:eu-repo/semantics/openAccessAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)