Marcadores de apoptosis en leishmania panamensis inducidos por la terapia fotodinámica utilizado ftalocianina de aluminio clorada como fotosensibilizador - Valdivieso Quintero, Wilfredo (Universidad Industrial de Santander, 2010)
La muerte celular programada es un proceso altamente regulado descrito en células de mamífero y organismos unicelulares. Diferentes compuestos con actividad anti-Leishmania inducen la expresión de marcadores de apoptosis. El tratamiento fotodinámico (TFD) utilizando ftalocianina de aluminio clorada (PcAlCl) ha mostrado efectividad contra diferentes especies de Leishmania. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto del TFD con PcAlCl en la expresión de marcadores de apoptosis en promastigotes y amastigotes intracelulares de L. panamensis. Se determinó la internalización y localización intracelular de la PcAlCl por microscopia confocal y la actividad de los compuestos luego del TDF por microscopía luz y por MTT. Se determinaron la expresión de marcadores de muerte celular 0, 6,1 2 y 24 horas post irradiación. Los cambios morfológicos se determinaron por microscopia luz, la actividad mitocondrial, expresión de fosfatidilserina y fragmentación del ADN por fluorescencia y/o electroforesis y la actividad de caspasa 3 por una prueba colorimétrica. La PcAlCl fue internalizada en promastigotes y en células THP-1 y se encontró localización mitocondrial en las células THP-1. La susceptibilidad al TFD fue observada en los promastigotes con CC90= 0,14± 0.02µM y en los amastigotes la muerte se presentó a la par con la muerte de la célula hospedera en concentraciones superiores a 0,18 µM. Se observaron cambios morfológicos asociados con apoptosis (diminución del tamaño celular y pérdida del núcleo y el kinetoplasto) y fragmentación del ADN luego del TFD en promastigotes y amastigote intracelulares. Adicionalmente en promastigotes se observaron otros marcadores como la expresión de fosfatidilserina y pérdida de la actividad mitocondrial, pero no se observó actividad de caspasa 3. La expresión de los marcadores de apoptosis observados aumentó con el paso del tiempo. Este estudio muestra que promastigotes y amastigotes intracelulares de L. panamensis son susceptibles al TFD y que la muerte por este tratamiento induce la expresión de marcadores de apoptosis sin la activación de enzimas con actividad de caspasa 3.
Apoptosis markers in leishmania panamensis induced by phtodynamic treatment using aluminun chloride phthalocyanine as photosensitizer
Keywords: Apoptosis; Terapia fotodinámica; Muerte celular; Leishmania.; Apoptosis; Photodynamic therapy; Cellular death; Leishmania