Escuela de Microbiología

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Browsing Escuela de Microbiología by browse.metadata.advisor "Gutiérrez Triana, José Arturo"

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    Establecimiento de líneas celulares de leucemia linfoblástica aguda de precursores b con coexpresión constitutiva e inducible de los genes id1, id3 e igj mediante plásmidos recombinantes
    (Universidad Industrial de Santander, 2021) Rincón Reyes, Diego Fernando; Gutiérrez Triana, José Arturo; Cruz Rodríguez, Nataly
    TetOn; Tol2 transposasa La leucemia linfoblástica aguda de precursores B (LLAB) es una neoplasia hematológica con una alta incidencia en Colombia y unos bajos indicadores de supervivencia en comparación con otros países del mundo (Allemani et al., 2018). Actualmente, la información sobre los determinantes moleculares de la LLAB en Colombia son muy limitados. Debido a esto, nuestro grupo identificó una firma de expresión génica que se correlaciona con el pronóstico de los pacientes adultos colombianos con LLAB (CruzRodriguez et al., 2016). Los pacientes que sobreexpresan simultáneamente los genes ID1, ID3 e IGJ muestran una baja respuesta al tratamiento de inducción y una baja supervivencia, lo que sugiere que estos genes podrían ser parte de un mecanismo de resistencia de las células leucémicas hacia los agentes quimioterapéuticos. Para probar esta hipótesis, integramos copias adicionales de los genes ID1, ID3 e IGJ en el genoma de la línea celular LLAB NALM6 con el fin de manipular simultáneamente su expresión. Esto se logró usando un policistrón compuesto de las secuencias codificantes de cada gen de interés marcado con péptidos etiqueta y separados por péptidos de autoclivaje virales tipo P2A. El policistrón fue regulado por un promotor constitutivo (CMV) o un promotor inducible dependiente de tetraciclina (TRE3G). La integración genómica fue realizada por la enzima Tol2 transposasa. Analizamos la expresión de la firma y sus productos en modelos estables usando RTqPCR y Western blot. Encontramos que, a diferencia de las células 293T, en los modelos constitutivos NALM6 el policistrón está sujeto a un silenciamiento activo, mientras que el sistema inducible utilizado no logró sobreexpresar los genes de interés en ninguna línea. Sorpresivamente, se detectó una alteración en los niveles de expresión endógena del gen IGJ por la presencia de los transgenes en el genoma. Proponemos recomendaciones para ajustar los modelos y obtener los resultados esperados
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    Establecimiento de líneas celulares de leucemia linfoblástica aguda de precursores b con coexpresión constitutiva e inducible de los genes ID1, ID3 e IGJ mediante plásmidos recombinantes
    (Universidad Industrial de Santander, 2021) Rincón Reyes, Diego Fernando; Cruz Rodríguez, Nataly; Gutiérrez Triana, José Arturo; Rey Buitrago, Mauricio; Terán Pérez, Wilson
    La leucemia linfoblástica aguda de precursores B (LLA-B) es una neoplasia hematológica con una alta incidencia en Colombia y unos bajos indicadores de supervivencia en comparación con otros países del mundo (Allemani et al., 2018). Actualmente, la información sobre los determinantes moleculares de la LLA-B en Colombia son muy limitados. Debido a esto, nuestro grupo identificó una firma de expresión génica que se correlaciona con el pronóstico de los pacientes adultos colombianos con LLA-B (Cruz-Rodriguez et al., 2016). Los pacientes que sobreexpresan simultáneamente los genes ID1, ID3 e IGJ muestran una baja respuesta al tratamiento de inducción y una baja supervivencia, lo que sugiere que estos genes podrían ser parte de un mecanismo de resistencia de las células leucémicas hacia los agentes quimioterapéuticos. Para probar esta hipótesis, integramos copias adicionales de los genes ID1, ID3 e IGJ en el genoma de la línea celular LLA-B NALM-6 con el fin de manipular simultáneamente su expresión. Esto se logró usando un policistrón compuesto de las secuencias codificantes de cada gen de interés marcado con péptidos etiqueta y separados por péptidos de autoclivaje virales tipo P2A. El policistrón fue regulado por un promotor constitutivo (CMV) o un promotor inducible dependiente de tetraciclina (TRE3G). La integración genómica fue realizada por la enzima Tol2 transposasa. Analizamos la expresión de la firma y sus productos en modelos estables usando RT-qPCR y Western blot. Encontramos que, a diferencia de las células 293T, en los modelos constitutivos NALM-6 el policistrón está sujeto a un silenciamiento activo, mientras que el sistema inducible utilizado no logró sobreexpresar los genes de interés en ninguna línea. Sorpresivamente, se detectó una alteración en los niveles de expresión endógena del gen IGJ por la presencia de los transgenes en el genoma. Proponemos recomendaciones para ajustar los modelos y obtener los resultados esperados.
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    Identificación de perfiles metabólicos de células tumorales de Leucemia Linfoblástica Aguda de Precursores B (LLA-B) relacionados con variables biológicas y clínicas de la enfermedad
    (Universidad Industrial de Santander, 2024-05-18) Pachón Meza, Karen Lizeth; Gutiérrez Triana, José Arturo; Sanabria Barrera, Sandra Milena; Calderón, Martha Nancy; Méndez, Stelia Carolina
    La Leucemia Linfoblástica Aguda de Precursores B (LLA-B) es un tipo de cáncer originado en la médula ósea, que se caracteriza por la proliferación descontrolada de precursores de células B como consecuencia de las alteraciones genéticas, metabólicas y funcionales. En Colombia, los datos epidemiológicos sobre esta enfermedad son preocupantes, ya que ocupa el tercer lugar en incidencia anual y presenta menores tasas de supervivencia en comparación con otros países de la región. Sin embargo, faltan estudios que relacionen el mal pronóstico en Colombia con la biología de la enfermedad. En este contexto, el objetivo del presente trabajo fue identificar y describir los perfiles metabólicos relacionados con variables biológicas y clínicas en pacientes con LLA-B del área metropolitana de Bucaramanga. El estudio incluyó la realización de pruebas de metabolismo oxidativo y glucolítico en linfoblastos tumorales aislados utilizando el analizador Seahorse XFe24, la evaluación de la expresión de la firma génica de mal pronóstico ID1/ID3/IGJ y la revisión de la historia clínica de 33 pacientes incluidos en el estudio. Los resultados encontrados sugieren que los linfoblastos tumorales tienen una actividad energética baja con respecto a la línea celular LLA-B de referencia NALM-6. Adicionalmente, dichas células malignas estarían representadas en dos grupos de pacientes, aquellos con potencial metabólico OCR y aquellos con potencial metabólico ECAR. Además, se identificó que el aumento de la expresión del gen IGJ se encuentra relacionado significativamente con un aumento del potencial ECAR, y una menor Supervivencia Libre de Evento (SLE) en los pacientes diagnosticados con LLA-B.