Inmovilización de la enzima peroxidasa de rábano picante sobre óxido de grafeno

Abstract

En este trabajo se llevó a cabo la síntesis del óxido de grafeno (OG) para su posterior uso como soporte sólido para la inmovilización de la enzima peroxidasa de rábano picante (HRP, por sus siglas en inglés) mediante la formación de enlaces tipo covalente. El OG fue obtenido a partir del grafito mediante oxidación química, dando como resultado un material con abundantes grupos funcionales que favorecen su modificación y uso como soporte. La inmovilización de la HRP se realizó mediante la activación de los grupos carboxilo del OG utilizando el sistema EDC/NHS, permitiendo la formación de enlaces covalentes con los grupos amino (-NH2) de la enzima. Se realizaron diferentes relaciones OG-HRP y tiempos de acoplamiento, gracias a esto se evidenció que la condición 10:1 con 4 horas de acoplamiento fue la que presentó mayor porcentaje de inmovilización. La actividad enzimática fue determinada por medio de la oxidación del guayacol, analizando la cantidad de enzima en los sobrenadantes y el sistema, se observó que la enzima conserva su actividad catalítica después de inmovilizada. Finalmente, se evaluó la estabilidad del sistema mediante 4 ciclos de reutilización con 5 días de diferencia, observándose una disminución controlada de la actividad enzimática asociada al número de ciclos y no al tiempo. Sin embargo, el sistema mantuvo el 85.4% de su actividad inicial después de 4 ciclos, demostrando su potencial como catalizador biológico.