Síntesis en fase sólida y caracterización por espectrometría de masas maldi-tof de un péptido con patrón de cisteínas similar a las a-conotoxinas presente en el veneno de conus purpurascens

Abstract

Se sintetizó la conotoxina de secuencia SGCCKHPACGKNRC, presente en el veneno del caracol Conus purpurascens. Este péptido posee un patrón de cisteínas (C1C2-C3-C4) propio de la familia de -conotoxinas, las cuales tienen una actividad biológica contra enfermedades neurodegenerativas e intervienen en los procesos de la sinapsis colinérgica, razón por la cual se hace interesante el estudio de la secuencia mencionada. La síntesis del péptido reducido se llevó a cabo por medio de la metodología en fase sólida (SPPS), usando la estrategia 9-fluorenilmetoxicarbonilo (N-Fmoc) y la protección selectiva de los residuos de cisteína con dos grupos diferentes, el acetamidometilo para las C1C3, y el tritilio para las C2C4. La oxidación o formación de enlaces disulfuro intramoleculares se realizó utilizando una solución de yodo en un solvente determinado, se realizó con el péptido unido al soporte y en solución. Se purificó por liofilización y extracción en fase sólida (SPE) usando una columna C-18 y gradientes de soluciones desde 0 hasta 100% de ACN/H2O con 0.1% de TFA. Por último, se caracterizó el péptido reducido y la conotoxina por espectrometría de masas MALDI-TOF, monitoreando la síntesis en cada uno de los acoples. Se mejoró las condiciones de síntesis para esta secuencia obteniendo el mayor grado de pureza.