Estudio de oligomerización de invertasa de saccharomyces cerevisiae mediante entrecruzamiento intermolecular

Abstract

Las enzimas son catalizadores biológicos con una actividad catalítica y selectividad mayor que los catalizadores inorgánicos convencionales. La â-fructofuranosidasa perteneciente al grupo de las carbohidrasas es una enzima utilizada en la industria de alimentos para la fabricación de azúcar invertido (fructosa+glucosa), el cual es mucho más dulce y menos cristalizable que la sacarosa. En este proyecto, se efectuó un estudio de la oligomerización de â-fructofuranosidasa de Saccharomyces cerevisiae, obteniéndose las diferentes formas oligoméricas de la enzima por medio de entrecruzamiento intermolecular con gluteraldehído. Además, se evaluó su estabilidad frente a los efectos de solventes como el etanol, la acetona y el tetrahidrofurano; y la estabilidad térmica de dichos agregados, siendo comparada con las obtenidas para la enzima soluble. Se realizó el entrecruzamiento intermolecular de agregados enzimáticos (CLEAs) y de enzima solubilizada (CLEs). Los CLEAs se prepararon inicialmente utilizando como agente precipitante sulfato de amonio y gluteraldehído al 1%. Sin embargo, probablemente el ion NH4+ presente en esta sal inactivó la enzima obteniéndose entrecruzados enzimáticos con menor actividad que la invertasa soluble. Por esta razón, se prosiguió a preparar CLEs utilizando la misma concentración de gluteraldehído, logrando un incremento de la actividad específica pasando de 711 U/mg a 914 U/mg. Aunque se aumentó la actividad específica de los CLEs, su estabilidad térmica fue significativamente menor que la presentada por la enzima soluble. De igual manera sucedió con la estabilidad en etanol, acetona y THF, solventes orgánicos miscibles en agua. Se trató de confirmar el entrecruzamiento de las diversas formas oligoméricas de la invertasa por medio de electroforesis en geles de poliacrilamida, sin embargo, los entrecruzados obtenidos presentaron una gran aglomeración imposibilitando su separación por electroforesis en una dimensión en condiciones nativas.