Establecimiento de líneas biosensoras fluorescentes genéticamente codificadas para glucocorticoides en modelos celulares eucarióticos y procarióticos

Abstract

En la última década, los disruptores endocrinos (EDC) han emergido como una preocupación crucial para la salud pública debido a su capacidad para alterar la homeostasis hormonal. Estos compuestos interfieren con la síntesis, el metabolismo y la actividad de las hormonas, impactando múltiples ejes, incluyendo los sistemas hipotálamo-hipófisis-tiroides (HPT), gonadal (HPG) y suprarrenal (HPA). Su mecanismo de acción más conocido involucra la unión a receptores nucleares (NR), como el receptor de glucocorticoides (GR). La evaluación de los EDC se ve obstaculizada por la escasez de métodos validados, lo que ha impulsado a organizaciones internacionales a solicitar el desarrollo de nuevas herramientas. En respuesta a esta necesidad, el presente trabajo se centró en la creación de dos biosensores genéticamente modificados: uno a nivel transcripcional y otro a nivel traduccional, ambos diseñados para detectar sustancias con potencial de activación del GR. El biosensor transcripcional, desarrollado en un modelo eucariota, empleó el sistema binario GAL4/UAS con el dominio de unión a ligando (LBD) del GR. Tanto la versión con el gen reportero integrado como la episomal mostraron una respuesta dosis-dependiente positiva a la dexametasona, aunque se observó una diferencia de aproximadamente 30 veces en su rango dinámico. Por otro lado, el biosensor traduccional, basado en un sistema de inteína fusionada al LBD-GR en un modelo bacteriano, logró la producción de las proteínas quiméricas pGFPintER y pGFPintGR mediante inducción IPTG/operón LacI. Sin embargo, no fue posible determinar la funcionalidad de estos biosensores ni evaluar el desempeño de la inteína RecA fusionada al LBD del GR, debido a problemas persistentes de solubilidad de las proteínas quiméricas.