Estudio bioenergético y análisis proteómico de mitocondrias de larvas (l4) de aedes aegypti (linnaeus, 1762) (diptera: culicidae)

Abstract

La mitocondria es una organela implicada en la producción de ATP mediante la fosforilación oxidativa, la cual está acoplada a la actividad de la cadena respiratoria. El estudio de los parámetros de respiración mitocondrial en insectos de importancia médica ofrece información importante para la comprensión de los diferentes procesos fundamentales del metabolismo energético de insectos vectores. El objetivo principal de este trabajo fue analizar la bioenergética mitocondrial y el proteoma de mitocondrias de larvas (L4) de Aedes aegypti. Se estandarizó un protocolo de aislamiento de mitocondrias de larvas L4, para la posterior medición de la respiración mitocondrial empleando un oxígrafo de alta resolución (Oroboros) en presencia de sustratos oxidables, fosfato inorgánico y ADP. Los mismos parámetros de medición de consumo de oxigeno fueron considerados en larvas permeabilizadas. Adicionalmente, se realizó la separación de proteínas mitocondriales (solubles y de membrana) mediante SDS-PAGUE para su posterior análisis por espectrometría de masas por MALDI-TOF y el software Mascot 2.1. Para mitocondrias aisladas el mayor valor de Coeficiente de control respiratorio (CCR) se obtuvo empleando prolina + piruvato como sustrato (1.14±0.04), con un CCR inducido por oligomicina de 1.35±0.10. Para larvas permeabilizadas se obtuvo un valor de CCR entre 1.2 a 1.3. En el análisis de los geles SDS se logró diferenciar un total de 6 bandas de proteínas solubles y 21 de proteínas de membrana, de las cuales se identificaron 6. Finalmente, de la medición de consumo de oxígeno, tanto en mitocondrias aisladas, como en larvas permeabilizadas, se obtuvieron valores cercanos, por ello se pudo afirmar que es posible la medición del CCR en larvas permeabilizadas, además que de esta manera resulta más práctica la medición en términos experimentales. Fueron identificadas 6 proteínas mitocondriales: Piruvato deshidrogenasa quinasa, PP2C-CG9801, ATP sintasa (su-CoA sintetasa y chaperona HSP60. Esta información representa un conocimiento de base de las proteínas mitocondriales de larvas (L4) de Ae. aegypti. _