Estudio computacional de los complejos de michaelis (mccs) entre el mutante a282v de lipasa b de candida antarctica y el (r, s) - propranolol

Abstract

Experimentalmente en la resolución cinética del (R, S)-propranolol catalizada por la Lipasa B de Candida antarctica (CalB) se ha logrado alcanzar una enantioselectividad menor de 70. Con el fin de comprender la enantioselectividad de la reacción, en el Grupo de Bioquímica Teórica de la UIS se está evaluando el efecto, in silico, de introducir mutaciones en el sitio activo de CalB, entre ellas la mutación Ala282Val (A282V). Mediante programas de acoplamiento molecular se exploran las formas como el sustrato interactúa con la enzima. Con esta simulación se logra conocer estructuralmente a los primeros complejos formados entre la enzima y el sustrato, conocidos como complejos de Michaelis (MCCs). Teniendo en cuenta la complejidad de la reacción de acilación catalizada por CalB, en este trabajo de grado se evalúa el efecto de emplear un tratamiento rígido y un tratamiento flexible de la CalB sobre los MCCs formados al introducir la mutación A282V. Se utilizó el programa Vina para modelar los MCCs entre la enzima mutante CalB_A282V y el (R, S)-propranolol empleando dos enfoques diferentes de acoplamiento molecular: a) enzima rígida y sustrato flexible, y b) algunos residuos aminoacídicos del sitio activo de la enzima flexibles y sustrato flexible. Se tuvo en cuenta la población de MCCs, la energía libre de afinidad, los modos de unión del (R, S)-propranolol en el sitio activo de CalB y las interacciones no covalentes para evaluar el efecto de la mutación A282V. Los resultados indican que el acoplamiento molecular flexible permite una mayor población de MCCs, energía libre de afinidad más negativa y diferentes modos de unión de los MCCs entre CalB_A282V y el (R, S)-propranolol con respecto al tratamiento de la enzima con un enfoque rígido. Lo anterior permite sugerir que al realizar acoplamientos moleculares la proteína sea tratada con un enfoque flexible.