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Aislamiento de mitocondrias de rhodnius prolixus stäl 1859 (hemiptera: reduviidae: triatominae)

Resumen

El insecto Rhodnius prolixus es un triatomino vector de la enfermedad del Chagas transmitida por el protozoario Trypanosoma cruzi. Un modelo de evaluación de la acción de nuevos compuestos con actividad insecticida puede ser estudiado en los complejos de la cadena respiratoria de la mitocondria en insectos. De acuerdo a esto, en este trabajo se estableció un método de aislamiento de mitocondrias de R. prolixus usando un método de centrifugación diferencial y la estimación de la respiración celular por medio de técnicas polarográficas y de espectrofotometría.. Se obtuvo mitocondrias con un rendimiento de 7,11 ± 0,11 mg de proteína/g de insecto. Los controles respiratorios realizados mostraron los siguientes valores en nmol O2min-1mg-1 de proteína: Estado 1 de 0,142 ± 0,008, estado 2 2,508 ± 0,337, estado 3 2,839 ± 0,752, estado 4 inducido por oligomicina 1,214 ± 0,749, estado 4 inducido por BSA 1,443 ± 0,154, estado desacoplado 1,616 ± 0,385. Se midió las actividades de las enzimas mitocondriales, donde se obtuvo valores para la NADH oxidasa 28,955 ± 4,445 nmol O2min-1mg-1 de proteína, NADH deshidrogenasa 0,3344 ± 0,0760 min-1mg-1 proteína, NADH citocromo c reductasa 0,2801 ± 0,048 µmoles citocromo c -1-1 proteína, succinato oxidasa 3,29 ± 0,613 nmol O2min-1mg-1 de proteína, succinato deshidrogenasa 0,83 ± 0,234 µmoles DCPIP reducidomin-1mg-1 de proteína, succinato citocromo c reductasa 437,8 ± 2,56 nmoles citocromo c -1-1 proteína, citocromo c oxidasa 2,11 ± 0,278 nmoles citocromo c -1-1 y ATPasa 0,609 ± 0,067 µmoles Fosfato hidrolizadomin-1-1 proteína. De esta manera se estableció un protocolo de extracción de mitocondrias fragmentadas que podrá ser utilizado como metodología de extracción de mitocondrias útil en estudios donde se evalué la actividad insecticida en las proteínas de la membrana interna de las mitocondrias de Rhodnius prolixus.