Inducción a la expresión de la ribonucleasa A a partir de la transferencia de plásmidos de bacterias no competentes a bacterias competentes

Abstract

Las ribonucleasas son enzimas que catalizan la degradación del ARN y participan en procesos esenciales como su regulación, procesamiento y maduración celular. Debido a sus propiedades citotóxicas, algunas ribonucleasas han sido ampliamente estudiadas en investigación biomédica y evaluadas como agentes terapéuticos en el tratamiento de tumores sólidos avanzados, así como en enfermedades infecciosas y cáncer. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar y optimizar las condiciones de inducción, extracción y purificación de la ribonucleasa A recombinante, producida mediante la transformación de plásmidos en bacterias competentes. Se analizaron diferentes métodos de extracción proteica, tanto mecánicos como químicos, y se estudiaron variables clave del proceso de inducción, incluyendo la concentración del inductor isopropil β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG), el tiempo y la temperatura de incubación. Posteriormente, se optimizaron los parámetros de purificación empleando cromatografía líquida de alta resolución para proteínas. Como resultado, se estableció que la extracción por choque osmótico, tras una inducción de 16 horas a 20 °C con una concentración de 0.6 mM de IPTG, permitió obtener una mayor recuperación de la proteína. La purificación se realizó exitosamente mediante cromatografía de intercambio catiónico. Estos resultados evidencian que el uso de sistemas bacterianos para la producción de proteínas recombinantes representa una alternativa eficiente, económicamente viable y ambientalmente sostenible, al reducir la dependencia de fuentes naturales limitadas y disminuir significativamente los tiempos y costos de producción.