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Estandarización del método de Lugol-carbohidrato para la evaluación de la actividad enzimática de α-amilasa de Zea mays L.

Abstract

La enzima α-amilasa representa cerca del 25-30% de la producción total de enzimas en el mundo y al igual que el almidón, es ampliamente empleada en industrias de alimentos, papel, textil, de detergentes, entre otras. En este trabajo se llevó a cabo la estandarización del método de Lugol para la determinación de la actividad enzimática de α-amilasa por medio de espectroscopia UV[1]Vis. Para ello, se realizó el estudio de la preparación del reactivo de Lugol, el complejo yodo[1]almidón y la linealidad de los mismos; por lo tanto, la curva de calibración se elaboró utilizando 10µL del reactivo de Lugol a una concentración de yodo igual a 0.658 M (1,5 %p/v de I2 y 10%p/v de KI) y 2.99 mL de soluciones de almidón a concentraciones 0,0025, 0,005, 0,0075, 0,01 %p/v, elaboradas a partir de una solución madre 0,02 %p/v; la medición de la absorbancia se realizó a 570 nm. Por consiguiente, se efectúo la extracción de la enzima α-amilasa de granos de Zea Mays L ICA V-305 y se utilizó 1 mL de dicho extracto crudo, con una concentración de proteínas de 12,51 µg/mL, para evaluar el efecto del pH y la temperatura, en consecuencia, se obtuvo un pH y temperatura óptima de 6 y 80°C, respectivamente. Además, a sus condiciones óptimas, se evaluaron las constantes cinéticas Km y Vmáx, para las cuales se obtuvo un valor de 0,04624 %p/v y 1,497 %p/v.min-1 , respectivamente. Finalmente se determinó una actividad enzimática a pH 6, 80°C, empleando como sustrato una solución de almidón de 0.1% p/v, correspondiente a 1.677 UmL-1 con el método de DNS y de 7.709 UmL-1 con el método de Lugol, resultados que se compararon.