Implementación de un método de análisis de péptidos de cadena corta (5-30 aminoácidos) por espectroscopia de fluorescencia

Abstract

Este trabajo presenta la fluorescencia de PLB y PG de secuencias WKLLSKAQEKFGKNKSR, AGDDADYFCQVWASRDDH, respectivamente. Los péptidos PLB y PG tienen triptófano, el péptido PLB presenta una actividad biológica antibacteriana contra Bacillus Subtilis, Escherichia Coli O157:H7, el péptido PG posee cualidades antigénicas, podría generar anticuerpos específicos que brindarían información de los procesos predominantes implicados en la fisiopatología que sirve en el diagnóstico o pronóstico del Síndrome Coronario Agudo, razón por la cual se hace interesante el estudio de fluorescencia de las secuencias mencionadas. La interacción entre PLB y el Buffer Britton Robinson, PG y el Buffer Tris-HCl, se realizó bajo condiciones controladas de pH, para evitar desnaturalización de PG y PLB, de esta forma, la muestra no se degrada con el tiempo y permanece estable al ser analizada por espectroscopia de fluorescencia. Los experimentos comprobaron la fluorescencia intrínseca del triptófano y por ello no se realiza marcaje en Rodamina B, la cantidad de emisión Fluorescente aumentó considerablemente en la intensidad de fluorescencia al aumentar la concentración, propio efecto de la fluorescencia intrínseca de las muestras PLB y PG. Para caracterizar las muestras inicialmente se tomaron espectros de absorción U.V-Vis y Maldi Toff Ms , posteriormente se evalúa por espectroscopia de emisión (fluorescencia) cada muestra PLB y PG. Los coeficientes de correlación para PLB (0.93) y PG (0.98), con desviaciones se encuentran por debajo del 1% y 5%, son evaluadas en diluciones que involucraron el rango de trabajo de la curva estándar. Las curvas de calibración para PG y PLB, el método aplicado a las muestras PLB Y PG donde los límites de detección obtenidos fueron: 7.95x10- 6 [mol/L] y 2.12 x10-7 [mol/L], los límites de cuantificación 2.65 x10-5 [mol/L] y 7.06x10-5 [mol/L] respectivamente. De acuerdo a los resultados obtenidos en el presente trabajo la fluorescencia es un método altamente sensible, haciendo disoluciones mínimas e incluso trazas.