Semi-purificación y caracterización parcial de la peroxidasa de pasto guinea (Panicum maximum)

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dc.contributor.advisorCastillo León, John Jairo
dc.contributor.authorCenteno Garcia, Diana Alejandra
dc.date.accessioned2024-03-03T23:32:01Z
dc.date.available2017
dc.date.available2024-03-03T23:32:01Z
dc.date.created2017
dc.date.issued2017
dc.description.abstractEn este trabajo la enzima peroxidasa fue extraída de las hojas de pasto guinea (Panicum maximum) y parcialmente purificada mediante reparto bifásico con PEG 14% y (NH4)2SO4 al 10%, luego se empleó cromatografía de exclusión por tamaño sobre una columna Sephadex G50 y finalmente se concentró el extracto con amicones de 10000 Da. Después de este proceso se consiguió aumentar el valor de la actividad específica y el grado de pureza hasta 408,9 U/mg y 3,16, respectivamente. La peroxidasa de pasto guinea (PPG) fue caracterizada parcialmente para determinar la estabilidad frente al pH donde se determinó que un intervalo de pH entre 4 y 12 la actividad enzimática se conserva hasta en un 75%, además se hizo un análisis de termoestabilidad donde se determinó que a una temperatura de 66°C la actividad enzimática se mantiene en un 73,7%. Para el estudio de la especificidad sustrática se empleó un diseño experimental de superficie de respuesta de composición central (DCC) 24 y el software STATGRAPHICS plus, con ello se encontraron las condiciones óptimas de pH, concentración de buffer, concentración de peróxido de hidrógeno y concentración de sustrato para el ABTS, guayacol y o-dianisidina. Se estableció que las mejores condiciones fueron sustrato (guayacol y H2O2) (9,99 y 8,0 mM, respectivamente), tipo de buffer (tampón de 10 mM fosfato), pH (5,0) y tiempo (1,5 min). Con estos resultados prometedores, en cuanto a sus propiedades bioquímicas (alta actividad específica, estabilidad frente al pH y temperatura) la peroxidasa de pasto guinea demuestra ser una alternativa ideal para aplicaciones industriales como biosensores, bioquímica clínica o biorremediación de aguas residuales de refinerías de petróleo, industrias textiles, de polímeros, resinas y papel, entre otras.
dc.description.abstractenglishIn this work the peroxidase enzyme was extracted from guinea grass leaves (Panicum maximum) and partially purified by biphasic partition with PEG 14% and (NH4)2SO4 10%, followed by size exclusion chromatography on a Sephadex column G50 and finally the extract was concentrated with amikons 10000 Da. After this process it was possible to increase the value of the specific activity and the degree of purity up to 408,9 U/mg and 3,16, respectively. The guinea grass peroxidase (GGP) was partially characterized to determine the stability to pH where it was determined that a pH range between 4 and 12 the enzymatic activity is conserved up to 75%, besides a thermostability analysis was performed where determined that at a temperature of 66 °C the enzymatic activity is maintained at 73,7%. A central composite response surface (DCC) 24 design and the STATGRAPHICS plus software were used for the study of the specificity of the samples, the optimum conditions of pH, buffer concentration, hydrogen peroxide concentration and concentration of substrate for ABTS, guaiacol and o-dianisidine were found. It was established that the best conditions were substrate (guayacol and H2O2) (9,99 and 8,0 mM, respectively), buffer type (10 mM phosphate buffer), pH (5,0) and time (1,5 min ). With these promising results, as regards its biochemical properties (high specific activity, stability to pH and temperature), guinea grass peroxidase proves to be an ideal alternative for industrial applications such as biosensors, clinical biochemistry or bioremediation of wastewater from oil refineries , Textiles, polymers, resins and paper industries, among others.
dc.description.degreelevelPregrado
dc.description.degreenameQuímico
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.identifier.instnameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.reponameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.repourlhttps://noesis.uis.edu.co
dc.identifier.urihttps://noesis.uis.edu.co/handle/20.500.14071/37414
dc.language.isospa
dc.publisherUniversidad Industrial de Santander
dc.publisher.facultyFacultad de Ciencias
dc.publisher.programQuímica
dc.publisher.schoolEscuela de Química
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)
dc.rights.licenseAttribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0
dc.subjectPeroxidasa De Pasto Guinea
dc.subjectExtracción De Enzimas
dc.subjectPanicum Maximum
dc.subjectPurificación De Enzimas
dc.subjectCaracterización Parcial.
dc.subject.keywordGuinea Grass Peroxidase
dc.subject.keywordEnzyme Extraction
dc.subject.keywordPanicum Maximum
dc.subject.keywordEnzyme Purification
dc.subject.keywordPartial Characterization.
dc.titleSemi-purificación y caracterización parcial de la peroxidasa de pasto guinea (Panicum maximum)
dc.title.englishSemi-purification and partial characterization of peroxidase of guinea grass (panicum maximum)
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bcce
dc.type.hasversionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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