Aislamiento y caracterizacion de mutantes resistentes a nitrato de galio en cepas de pseudomonas aeruginosa aisladas de pacientes con fibrosis quistica

Abstract

La resistencia a galio en las cepas clínicas de referencia PAO1 y PA14 de Pseudomonas aeruginosa puede emerger fácilmente. Este trabajo tiene la finalidad de estudiar la resistencia al galio en cepas clínicas de recién aislamiento provenientes de pacientes con fibrosis quística y además determinar qué tan rápido se hacen resistentes, así como los mecanismos de resistencia implicados. Se seleccionaron posibles cepas mutantes resistentes a galio a partir cultivos de 10 aislados clínicos y de la cepa PA14 como control sometiéndolos a diferentes concentraciones de galio para evaluar la susceptibilidad al mismo y el número de generaciones necesarias hasta la obtención de cepas resistentes. Se hicieron cultivos secuenciales de las cepas en las que se observó la aparición de resistencia al galio y se aislaron posibles mutantes espontáneas resistentes. Finalmente se evaluó la producción de pioverdina; piocianina y contenido de galio intracelular por medio de técnicas espectrofotométricas y de absorción atómica para obtener información de los mecanismos por medio de los cuales las cepas se vuelven resistentes al galio. La obtención de resistencia a galio en cepas clínicas y de laboratorio de Pseudomonas aeruginosa se dio de manera espontánea, el número de generaciones promedio antes de presentar resistencia galio se encuentra entre 3 a 5 y es diferente para cada cepa, la producción tanto de pioverdina como piocianina puede estar relacionada con el mecanismo de resistencia de las mutantes obtenidas. La internalización de galio es mayor en las cepas parentales que en mutantes lo que hace evidente la resistencia a galio por parte de estas cepas clínicas. *