Caracterización de mutaciones puntuales de poblaciones de levaduras evolucionadas productoras de b-caroteno a traves de crispr-cas9
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Date
2019
Authors
Evaluators
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Publisher
Universidad Industrial de Santander
Abstract
En previas investigaciones, se obtuvieron -caroteno SM12, SM13 y SM14, utilizando la estrategia de adaptación evolutiva de laboratorio (ALE) (Reyes, Gomez, & Kao, 2014), donde se hizo la propagación de la cepa ancestro YLH2 por varias generaciones bajo la presión selectiva ejercida por el peróxido de hidrogeno, el cual está -caroteno y después se hizo la secuenciación del genoma de estas cepas evolucionadas. En este estudio cada una de las mutaciones puntuales identificadas en las cepas de levadura evolucionadas se reconstruyeron en la cepa ancestro usando la técnica de edición genética CRISPR-Cas9 y se analizaron los rendimientos de producción, la cinética de crecimiento y la tolerancia al estrés oxidativo de los mutantes puntuales reconstruidos. De manera que se logró identificar las mutaciones puntuales -caroteno. Los resultados mostraron que la mutación puntual presente en la región ymr045c/ymr046c del genoma de Saccharomyces cerevisiae -caroteno. Posteriormente, se hizo un análisis del efecto sinérgico de las diferentes mutaciones puntuales donde se logró encontrar una combinación de mutantes que incrementaba en más de un 30% el rendimiento de producción -caroteno en comparación con la mejor cepa evolucionada SM14. La producción de la cepa mejorada construida se escaló en un biorreactor de 1 L donde se logró obtener un rendimiento de 39.8 mg/g peso seco celular que fue un 82% mayor en comparación con la cepa SM14 después de 64 horas.
Description
Keywords
Β-Caroteno; Levadura; Mutación Puntual; Crispr-Cas9.