Desarrollo de un método optimizado de extracción de RNA a partir de muestras de sangre

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dc.contributor.advisorArteaga Narvaez, Herman Jose
dc.contributor.advisorCano Calle, Herminsul de Jesús
dc.contributor.authorCristancho Maldonado, Leidy Patricia
dc.date.accessioned2024-03-03T23:32:00Z
dc.date.available2017
dc.date.available2024-03-03T23:32:00Z
dc.date.created2017
dc.date.issued2017
dc.description.abstractActualmente existe una gran necesidad de obtener cantidades altas de RNA de buena calidad, a partir de diferentes fuentes, para un creciente número de aplicaciones en diversas áreas de trabajo. Varias casas comerciales han desarrollado estuches diseñados especialmente para la obtención de RNA de un tipo específico de muestra, e inclusive, para una aplicación determinada. Sin embargo estos reactivos no son siempre asequibles a toda la comunidad científica, en parte, debido a su alto costo. La sangre periférica es una de las principales fuentes de RNA y su obtención, transporte y almacenamiento son difíciles, especialmente durante trabajos de campo. Por lo anterior, se hace necesario el desarrollo de metodologías eficientes, accesibles a la mayor cantidad posible de investigadores y que requieran pequeñas cantidades de muestra. Con el fin de obtener una metodología eficiente y de bajo costo para la extracción de RNA, a partir de sangre periférica total, se optimizaron los pasos de lisis, extracción y purificación, de este procedimiento, basándonos en los principios básicos del método clásico de un solo paso, desarrollado por Chomczynski y Sacchi y adoptando nuevas tecnologías y procedimientos mejorados, propuestos por otros autores. Mediante este procedimiento se diseñaron diversos protocolos de extracción de RNA de sangre periférica total, los cuales combinan procesos mejorados para cada uno de los pasos de la técnica. Estos protocolos permitieron obtener una producción altamente eficiente de RNA de buena calidad, en menor tiempo y a partir de una pequeña cantidad de muestra. El protocolo que presento mejores resultados permitió alcanzar un rendimiento de 512 g de RNA, con una pureza dentro de los rangos establecidos para muestras de alta calidad (A260/A280=1,86 ± 0,02 y A260/A230 =1,96 ± 0,04) y por ende aptos para posteriores aplicaciones.
dc.description.abstractenglishThere is a great need for obtaining good amounts of high quality RNA, from different sources, for a growing number of applications in various work fields. Several companies have developed commercial kits, specially designed to obtain RNA from specific type of samples, and even, for a specific application. However, these reagents are not always affordable to all the scientific community. Peripheral blood is a major source of RNA and its acquisition, transport and storage is difficult, especially at field work. Therefore, it is necessary to develop efficient methods of RNA extraction, requiring small samples and accessible to as many researchers as possible. To obtain an efficient and low-cost method for RNA extraction from total peripheral blood, the steps of this procedure for lysis, extraction and purification, were optimized, based on the basic principles of the one step-classical method developed by Chomczynski and Sacchi and adopting new technologies and improved protocols, proposed by other authors. By this approach, various RNA extraction protocols, from peripheral blood, were designed, which combine the best improved procedures for each step. These methods allowed to obtain a highly efficient production of high quality RNA, in the shortest possible time and from a small amount of sample. The best developed protocol allowed to reach a 512 g of RNA yield, with a purity within the established ranges for high quality samples (A260 / A280 = 1,86 ± 0,02 and A260 / A230 = 1,96 ± 0.04) and therefore suitable for downstream applications.
dc.description.degreelevelPregrado
dc.description.degreenameQuímico
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.identifier.instnameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.reponameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.repourlhttps://noesis.uis.edu.co
dc.identifier.urihttps://noesis.uis.edu.co/handle/20.500.14071/37413
dc.language.isospa
dc.publisherUniversidad Industrial de Santander
dc.publisher.facultyFacultad de Ciencias
dc.publisher.programQuímica
dc.publisher.schoolEscuela de Química
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)
dc.rights.licenseAttribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0
dc.subjectSangre Total
dc.subjectExtracción De Rna
dc.subjectTrisure
dc.subjectTrizol Ls
dc.subjectColumnas Sílice
dc.subject.keywordTotal Blood
dc.subject.keywordRna Extraction
dc.subject.keywordTrisure
dc.subject.keywordTrizol Ls
dc.subject.keywordSilica Columns
dc.titleDesarrollo de un método optimizado de extracción de RNA a partir de muestras de sangre
dc.title.englishDevelopment of an optimized rna extraction method from blood samples
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bcce
dc.type.hasversionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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