Establecimiento de líneas celulares de leucemia linfoblástica aguda de precursores b con coexpresión constitutiva e inducible de los genes ID1, ID3 e IGJ mediante plásmidos recombinantes

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dc.contributor.advisorCruz Rodríguez, Nataly
dc.contributor.advisorGutiérrez Triana, José Arturo
dc.contributor.authorRincón Reyes, Diego Fernando
dc.contributor.evaluatorRey Buitrago, Mauricio
dc.contributor.evaluatorTerán Pérez, Wilson
dc.date.accessioned2022-04-01T04:14:52Z
dc.date.available2022-04-01T04:14:52Z
dc.date.created2021
dc.date.issued2021
dc.description.abstractLa leucemia linfoblástica aguda de precursores B (LLA-B) es una neoplasia hematológica con una alta incidencia en Colombia y unos bajos indicadores de supervivencia en comparación con otros países del mundo (Allemani et al., 2018). Actualmente, la información sobre los determinantes moleculares de la LLA-B en Colombia son muy limitados. Debido a esto, nuestro grupo identificó una firma de expresión génica que se correlaciona con el pronóstico de los pacientes adultos colombianos con LLA-B (Cruz-Rodriguez et al., 2016). Los pacientes que sobreexpresan simultáneamente los genes ID1, ID3 e IGJ muestran una baja respuesta al tratamiento de inducción y una baja supervivencia, lo que sugiere que estos genes podrían ser parte de un mecanismo de resistencia de las células leucémicas hacia los agentes quimioterapéuticos. Para probar esta hipótesis, integramos copias adicionales de los genes ID1, ID3 e IGJ en el genoma de la línea celular LLA-B NALM-6 con el fin de manipular simultáneamente su expresión. Esto se logró usando un policistrón compuesto de las secuencias codificantes de cada gen de interés marcado con péptidos etiqueta y separados por péptidos de autoclivaje virales tipo P2A. El policistrón fue regulado por un promotor constitutivo (CMV) o un promotor inducible dependiente de tetraciclina (TRE3G). La integración genómica fue realizada por la enzima Tol2 transposasa. Analizamos la expresión de la firma y sus productos en modelos estables usando RT-qPCR y Western blot. Encontramos que, a diferencia de las células 293T, en los modelos constitutivos NALM-6 el policistrón está sujeto a un silenciamiento activo, mientras que el sistema inducible utilizado no logró sobreexpresar los genes de interés en ninguna línea. Sorpresivamente, se detectó una alteración en los niveles de expresión endógena del gen IGJ por la presencia de los transgenes en el genoma. Proponemos recomendaciones para ajustar los modelos y obtener los resultados esperados.
dc.description.abstractenglishB Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL) is a hematological neoplastic, with a high incidence in Colombia and lower survival rates compared to other countries in the world (Allemani et al., 2018). Currently, the information of the molecular determinants of B-ALL in Colombia is very limited. On this subject, our group identified previously a gene expression signature correlating with the prognosis of Colombian adult patients with B-ALL (Cruz-Rodriguez et al., 2016). Patients displaying simultaneous overexpression of the ID1, ID3, and IGJ genes exhibit poor response to induction therapy and poor survival, suggesting these genes as part of a resistance mechanism of the leukemic cells to chemotherapeutic agents. To test this hypothesis, we integrated additional copies of ID1, ID3, and IGJ genes into the genome of the B-ALL cell line NALM-6 to manipulate simultaneously their expression. We achieved this using a polycistron composed of the coding sequences of each of the genes of interest labeled with tag peptides and separated by P2A-type viral self-cleavage peptides. The polycistron was driven by either a constitutive (CMV) or a tetracycline inducible (TRE3G) promoter. Genome integration was conducted by means of the Tol2 transposase. We analyzed the expression of the signature and their products of the stable lines using RT-qPCR and Western Blot. We found that, unlike 293T cells, in the constitutive NALM-6 models the polycistron is subject to active silencing, while the inducible system used did not accomplish to overexpress the genes of interest in any line. Surprisingly, an alteration in the levels of endogenous expression of the IGJ gene was detected due to the presence of transgenes in the genome. We propose recommendations to adjust the models and obtain the expected results.
dc.description.degreelevelMaestría
dc.description.degreenameMagíster en Microbiología
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.identifier.instnameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.reponameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.repourlhttps://noesis.uis.edu.co
dc.identifier.urihttps://noesis.uis.edu.co/handle/20.500.14071/9527
dc.language.isospa
dc.publisherUniversidad Industrial de Santander
dc.publisher.facultyFacultad de Salud
dc.publisher.programMaestría en Microbiología
dc.publisher.schoolEscuela de Microbiología
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.coarhttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2
dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)
dc.rights.licenseAttribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectLLA-B
dc.subjectExpresión génica
dc.subjectNALM-6
dc.subjectTet-On
dc.subjectTol2 transposasa
dc.subject.keywordB-ALL
dc.subject.keywordGene expression
dc.subject.keywordNALM-6
dc.subject.keywordTet-On
dc.subject.keywordTol2 transposase enzyme
dc.titleEstablecimiento de líneas celulares de leucemia linfoblástica aguda de precursores b con coexpresión constitutiva e inducible de los genes ID1, ID3 e IGJ mediante plásmidos recombinantes
dc.title.englishEstablishment of precursor B acute lymphoblastic leukemia cell lines with constitutive and inducible coexpression of ID1, ID3 and IGJ Genes using recombinant plasmids
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdcc
dc.type.hasversionhttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bcce
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestría
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