Evaluación de la concordancia entre los ensayos rojo neutro y cristal violeta para análisis de la citotoxicidad de extractos de plantas

Abstract

Existen distintos ensayos in vitro para evaluar la tendencia de muestras vegetales a causar toxicidad de células humanas. Con frecuencia, los datos son discordantes entre ensayos debido a falsos positivos o negativos por interferencia de las muestras con las reacciones enzimáticas del ensayo. Por lo tanto, el objetivo del trabajo fue determinar la concordancia de los ensayos colorimétricos Cristal Violeta (CV) y Rojo Neutro (RN) para verificar si la valoración de la citotoxicidad varía con el ensayo. Se usaron protocolos estándar de los ensayos CV y RN en células de riñón de mono (Vero) cultivadas en placas de 96 pozos. Muestras vegetales: extracto (EXT) o aceite esencial (AE) de cuatro plantas de Colombia. Los estadísticos factor Z, coeficiente de variación (CV), proporción señal fondo (S/B), y proporción señal ruido (S/N), se calcularon para determinar la confiabilidad y poder de cada ensayo. La concordancia entre los ensayos se estimó con el coeficiente de correlación de Sperman. Los resultados demostraron que el ensayo CV presentó mayor robustez y confiablidad respecto al ensayo RN tanto en los experimentos con químicos (factor Z': 0.8 vs 0.3; S/B: 9.9 vs 23; S/N: 24 vs 18; CV: 0.4 vs 1.6) como conlas muestras vegetales (factor Z' 0.9 vs 0.5; S/B: 15 vs 5.7; S/N: 11.0 vs 7.4; CV: 0.16 vs 0.25). Se encontró concordancia en la valoración de la citotoxicidad (r > 0.85; p<0.05), los valores de la concentración citotóxica 50 (CC50) fueron: AE-Baccharis trinervis, 107 ± 3.4 (CV) vs 174 ± 7.5 (RN); AE-Calycolpus moritzianus, 182 ± 8.6 (CV) vs 219 ± 66.0 (RN); EXT-Piper eriopodon 56 ± 2.8 (CV) vs 56 ± 4.7 (RN) y EXT-Hyptis sinuata >250 µg/mL con ambos ensyaos. Este estudio confirmó la utilidad de los ensayos colorimétricos para evaluar la citotoxicidad de muestras vegetales.