Expresión heteróloga de la lipasa a de bacillus subtilis (bsla) en escherichia coli bl21 (de3): transesterificación enzimatica mediante el uso de extractos crudos, aceite de palma y metanol

Abstract

La síntesis química de biodiésel genera residuos contaminantes; una solución biotecnológica a este problema es la transesterificación enzimática usando lipasas. No obstante, para Colombia, escalarlo a nivel industrial resulta inviable dados los costos de adquisición de las lipasas importadas (U.S.$ 1000-2000/kg). Una solución potencial a este problema es producir localmente lipasas en hospederos bacterianos. En este trabajo, se demostró la capacidad de la lipasa A de Bacillus subtilis (BSLA) para catalizar la transesterificación entre el aceite de palma africana y el metanol. Previamente, se evaluó in silico la estabilidad estructural de BSLA (código PDB 2qxu) en una mezcla de metanol y aceite de palma crudo. Posteriormente, se clonó el gen LipA en el vector pET22b y se indujo la sobreexpresión heteróloga en células de Escherichia coli transformadas, hasta alcanzar los máximos niveles de expresión. La producción recombinante de LipA se monitoreó mediante SDS-PAGE y por actividad hidrolítica sobre p-Nitrofenil butirato. Se realizaron ensayos de transesterificación usando extractos crudos de E. coli inducida con IPTG. Los resultados revelaron que BSLA cataliza reacciones de transesterificación, con una tasa de producción de 10.7% de metilésteres. Se concluyó que BSLA tiene potencial para producir biodiésel, aunque resta comparar su eficacia con las lipasas comerciales.