Estimados de danos genéticos en la rana de desarrollo directo eleutherodactylus johnstonbei (anura: eleutherodactylidae) mediante el ensayo cometa

Abstract

El propósito de este estudio fue establecer el ensayo Cometa para la medición de daño genético en la rana de desarrollo directo Eleutherodactylus johnstonei. El ensayo se realizó siguiendo el protocolo estándar de Singh ef al., (1988) con algunas modificaciones. Nuestros datos muestran que la solución amortiguadora de lisis alcalina no elimina las membranas citoplasmática y nuclear de células sanguíneas de E. johnstonei. La lisis alcalina fue sustituida por una digestión enzimática con proteinasa K (0,19 ug/mL) lo que permitió la obtención de núcleos desnudos. Se estimó el daño inducido por la bleomicina en el ADN de células sanguíneas de E. johnstonei, en ensayos con diferentes concentraciones (4,75 a 152 ug/mL) y diferentes tiempos de incubación (1 a 12 horas). Los resultados muestran que altas dosis de bleomicina y largos tiempos de exposición (12 horas) son necesarios para inducir daño genético en E. johnstonei, contrastando con lo observado en otras especies de ranas y en humanos. Se describe un protocolo de ensayo Cometa estandarizado para células sanguíneas de E. johnstonei. Con base en los datos obtenidos con el ensayo de Difusión de ADN nuclear, se detectó un número consistentemente bajo de núcleos apoptoticos/necróticos (5,7%), manteniendo niveles basales mínimos de daño. Los resultados sugieren que el ensayo Cometa puede ser un método preciso para determinar el daño genético en E. johnstonei, que resultan de la exposición a xenobióticos ambientales.