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Desarrollo de un protocolo de hibridación in situ en un lagarto placentotrófico obligado

Resumen

El presente documento muestra la estandarización de un protocolo de hibridación in situ (HIS) para la preparación de una sonda de ARN marcada con DIG a base de amplificados de PCR de β-actina y su implementación en cortes histológicos de hígado, ovario y músculo esquelético en una especie de lagarto vivíparo placentotrófico. Se detectó la expresión de ARNm usando la sonda de actina 1 T7 combinado con el sistema de detección de alcalina fosfatasa y el sustrato INT/BCIP. Se encontró la presencia de transcritos de ARNm de β-actina en los cortes estudiados. Para el caso del hígado su presencia fue homogénea, mientras que para el ovario y músculo fue diferencial dando mayor señal en las estructuras de sostén de los diferentes cortes, como lo es la teca en el ovario y los fibroblastos en el músculo. Se estandarizo de manera exitosa y por primera vez un protocolo de hibridación in situ en el Laboratorio de Biología Reproductiva de Vertebrados que puede ser implementado en futuros estudios.