Inmovilización de lipasa de cándida antárctica b sobre nanopartículas de magnetita : estudio de su estabilidad y actividad catalítica

Abstract

En este estudio, se realizó la síntesis de nanopartículas de magnetita por el método de coprecipitación de Fe2+ y Fe3+ en solución de hidróxido de sodio. Las nanopartículas fueron recubiertas con (3-(2-amino-etil-amino)propil)trimetoxisilano (APTS) 5% (v/v). Posteriormente, se hicieron reaccionar con glutaraldehído (10% v/v) a pH 7. Inmediatamente después, se agregó una solución (0.05 mg/mL) de lipasa Candida antárctica B (CALB) para su inmovilización covalente. La lipasa de Candida antárctica B fue inmovilizada también por interacciones iónicas en el soporte de magnetita y magnetita aminada. A su vez, se logró también la inmovilización covalentemente en la superficie de las nanopartículas magnéticas recubiertas con glutaraldehído. Las nanopartículas obtenidas fueron caracterizadas por Difracción de Rayos-X (DRX) obteniendo una fase cristalina de Fe3O4 correspondiente a la magnetita. El tamaño de las partículas se determinó por la técnica de Dispersión de Luz Dinámica (DLS) obteniéndose un tamaño promedio de 11 nm. Además, se identificaron los grupos funcionales en la superficie de las nanopartículas que son los responsables de la interacción proteína-soporte por Espectroscopia de Infrarrojo con Transformada de Fourier (IR-TF). La actividad enzimática de la CALB inmovilizada y soluble se determinó en solución salina de buffer de fosfato con la hidrólisis del sustrato p-nitrofenilbutirato (pNPB). Se realizaron los ensayos de cuantificación de proteína por el método de Bradford; también se estudió el efecto del pH en la inmovilización de la proteína y determinó la estabilidad térmica de la CALB inmovilizada en el soporte recubierto con glutaraldehído (Glu). Finalmente, se determinó la actividad de la CALB en un proceso de reutilización del bioconjugado.