Modulación del metabolismo de linfocitos CAR T: mejoramiento de su capacidad citotóxica in vitro

Abstract

Introducción: Las terapias con linfocitos CAR T anti-CD19 han transformado el abordaje de neoplasias hematológicas; no obstante, su eficacia a largo plazo se ve limitada por la diferenciación terminal y el agotamiento inducidos durante la expansión ex vivo. En este contexto, la modulación inmunometabólica se propone como una estrategia para optimizar la calidad funcional del producto celular. La metformina, modulador metabólico de uso clínico extendido, reprograma la bioenergética mitocondrial y favorece fenotipos de memoria en linfocitos T, lo que sustenta su evaluación traslacional en la manufactura de CAR T. Objetivo: Caracterizar en linfocitos CAR T anti-CD19 el inmunofenotipo, los cambios metabólicos y su capacidad citotóxica in vitro después del tratamiento con metformina. Metodología: Estudio experimental in vitro de linfocitos T purificados y CAR T anti-CD19 tratados con metformina o con UK-5099 (control positivo). La caracterización inmunofenotípica se realizó por citometría de flujo espectral y los datos se presentaron mediante UMAP. La cuantificación absoluta de genes implicados en rutas metabólicas y checkpoints se realizó por ddPCR. La evaluación funcional del perfil secretor (GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, IL-2) y de la granzima B se determinó mediante tinción intracelular. Resultados: La metformina reconfiguró el inmunofenotipo hacia estados no terminales, indujo una firma compatible con beta oxidación y redujo progresivamente la expresión transcripcional de PD-1, TIM-3, LAG-3 y CTLA-4. Funcionalmente, se observó un incremento significativo de IL-2 y granzima B en CD4⁺ y CD8⁺ (p=0.0209 y p=0.0015–0.0039, respectivamente), junto con un aumento controlado de GM-CSF (p=0.0433–0.0455) y una tendencia a mantener niveles contenidos de IFN-γ (p=0.0304–0.0024). El control positivo UK-5099 mostró una reprogramación más potente con aumentos de granzima B (p=0.0015–0.0433) y GM-CSF (p=0.0015), validando la potencia de la intervención mitocondrial. Conclusiones: La modulación inmunometabólica mediante metformina integra metabolismo, inmunofenotipo y potencia efectora, posicionándose como una estrategia viable para optimizar la calidad funcional de productos CAR T con proyección traslacional en su manufactura.