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Búsqueda de alternativas farmacológicas en parásitos de Leishmania (Leishmania) amazonensis resistentes a la miltefosina

Resumen

Introducción: La leishmaniasis comprende un grupo de enfermedades transmitidas por vectores, causadas por los parásitos Leishmania. En Colombia, el tratamiento estándar son los antimoniales pentavalentes (SbV); si hay efectos secundarios, falla terapéutica (FT) o contraindicaciones, se usan alternativas como miltefosina (MTF), entre otras. La MTF es el único medicamento disponible en forma oral, empleado en todas las formas clínicas, pero la FT ha aumentado y podría deberse a factores relacionados con el fármaco, el huésped o el parásito. De este último se han obtenido aislados de pacientes con FT y baja sensibilidad in vitro. Objetivo: evaluar la actividad de fármacos y compuestos en la reversión del fenotipo de resistencia, o como potenciadores de la actividad de la MTF, en parásitos de Leishmania (Leishmania) amazonensis resistentes a MTF (R-MTF). Metodología: Primera etapa: se generaron cepas R-MTF (10R, 20R, 30R y 40R) mediante presión selectiva con MTF. La cepa 40R se comparó con la cepa nativa o wild type (WT) en cinética de crecimiento, susceptibilidad a MTF y otros fármacos antileishmania, infectividad en células THP-1 y expresión/mutaciones de los genes mt y ros3. Segunda etapa: se evaluó la estabilidad del fenotipo resistente en las cepas R-MTF retirando la presión de MTF en el cultivo y tras infectar macrófagos. Tercera etapa: en la reversión de la resistencia, se evaluó la potencia de fármacos, compuestos derivados de plantas e inhibidores de receptores frente a las cepas 40R y WT; después se cultivaron a bajas concentraciones de los compuestos por 8 y 15 días, y se calculó la potencia (CI50) de la MTF. En el potenciamiento de la actividad de la MTF en la cepa 40R y WT, se determinó la actividad de la MTF + fármacos/compuestos en ensayos de combinación a razón fija, calculando la concentración inhibitoria fraccional (CIF) y el tipo de interacción (sinergia, aditiva o antagónica). Resultados: Primera etapa: comparada con la cepa WT, la cepa 40R presentó diferencias significativas (p<0,05) en su crecimiento más lento, incremento de la susceptibilidad de promastigotes a SbIII y a PMD, infección in vitro normal, resistencia de amastigotes intracelulares a SbIII, mutación puntual y mayor expresión del gen mt. Segunda etapa: la cepa 40R mantuvo la resistencia después de tres meses en cultivo sin MTF, y después de infectar células THP-1. Tercera etapa: la silibina (SLB) y el posaconazole (POZ) revirtieron el 50% y 70% de la resistencia en 40R, respectivamente; la combinación MTF+POZ mostró actividad sinérgica en 40R en la proporción 3:2. Conclusión: la cepa 40R presentó algunas diferencias con la cepa WT en sus características biológicas y mantuvo la resistencia hasta por 3 meses en cultivo sin el fármaco. La SLB y el POZ permiten la reversión de la resistencia a MTF en cepas 40R de L. amazonensis actuando como compuestos moduladores.