Desarrollo de un método optimizado de extracción de RNA a partir de muestras de sangre
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Date
2017
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Publisher
Universidad Industrial de Santander
Abstract
Actualmente existe una gran necesidad de obtener cantidades altas de RNA de buena calidad, a partir de diferentes fuentes, para un creciente número de aplicaciones en diversas áreas de trabajo. Varias casas comerciales han desarrollado estuches diseñados especialmente para la obtención de RNA de un tipo específico de muestra, e inclusive, para una aplicación determinada. Sin embargo estos reactivos no son siempre asequibles a toda la comunidad científica, en parte, debido a su alto costo. La sangre periférica es una de las principales fuentes de RNA y su obtención, transporte y almacenamiento son difíciles, especialmente durante trabajos de campo. Por lo anterior, se hace necesario el desarrollo de metodologías eficientes, accesibles a la mayor cantidad posible de investigadores y que requieran pequeñas cantidades de muestra. Con el fin de obtener una metodología eficiente y de bajo costo para la extracción de RNA, a partir de sangre periférica total, se optimizaron los pasos de lisis, extracción y purificación, de este procedimiento, basándonos en los principios básicos del método clásico de un solo paso, desarrollado por Chomczynski y Sacchi y adoptando nuevas tecnologías y procedimientos mejorados, propuestos por otros autores. Mediante este procedimiento se diseñaron diversos protocolos de extracción de RNA de sangre periférica total, los cuales combinan procesos mejorados para cada uno de los pasos de la técnica. Estos protocolos permitieron obtener una producción altamente eficiente de RNA de buena calidad, en menor tiempo y a partir de una pequeña cantidad de muestra. El protocolo que presento mejores resultados permitió alcanzar un rendimiento de 512 g de RNA, con una pureza dentro de los rangos establecidos para muestras de alta calidad (A260/A280=1,86 ± 0,02 y A260/A230 =1,96 ± 0,04) y por ende aptos para posteriores aplicaciones.
Description
Keywords
Sangre Total, Extracción De Rna, Trisure, Trizol Ls, Columnas Sílice