Estudio de la expresión de la proteína csga principal componente proteico de las fibras curli en cepas recombinantes de escherichia coli

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dc.contributor.advisorTorres Sáez, Rodrigo Gonzalo
dc.contributor.authorBenincore Flórez, Eliana Patricia
dc.date.accessioned2024-03-03T20:10:33Z
dc.date.available2013
dc.date.available2024-03-03T20:10:33Z
dc.date.created2013
dc.date.issued2013
dc.description.abstractMuchas enterobacteriáceas como E. coli pueden ensamblar fibras amiloides funcionales en su superficie celular. La mayoría de los amiloides bacterianos contribuyen a la formación de biopelículas y otros comportamientos en comunidad donde las células interactúan con una superficie o con otra célula. Los amiloides bacterianos, como todos los amiloides funcionales, comparten propiedades bioquímicas y estructurales con los amiloides eucarióticos asociados a enfermedades como Alzheimer, Parkinson, Diabetes tipo II, entre otras. In vivo, al menos seis proteínas, codificadas por los operones divergentes transcritos csgBA y csgDEFG, se dedican a la formación de curli en E. coli. El operón csgBA codifica la principal subunidad estructural, CsgA y la proteína nucleadora CsgB. Sin embargo, el desarrolló de este trabajó demostró que es posible obtener fibras curli obtenidas a partir de la polimerización in vitro de la proteína CsgA, en ausencia de las demás proteínas involucradas en la biogénesis curli. Aquí, la proteína CsgA fue producida in vivo, por dos cepas recombinantes de E. coli que fueron diseñadas genéticamente para expresar CsgA de forma intracelular y extracelular, a fin de comparar la formación de fibras curli bajo diferentes condiciones de expresión. La purificación de esta proteína se realizó mediante cromatografía de afinidad con ión metálico inmovilizado (IMAC). Se verificó la obtención in vitro de estructuras amiloides mediante análisis por espectroscopia de fluorescencia, aprovechando las características tintoriales de las fibras de tipo amiloide, y se observó la formación de un entramado fibrilar morfológicamente similar al entramado que forma las biopelículas bacterianas in vivo, dado por la polimerización de la proteína CsgA obtenida extracelularmente. Por el contrario, se observó que la proteína CsgA obtenida del medio intracelular, formó estructuras desordenadas y amorfas que impidieron la formación de fibras curli.
dc.description.abstractenglishMany Enterobacteriaceae such as E. coli can assemble functional amyloid fibers on their cell surface. Most bacterial amyloid contributes to the formation of biofilms and other behaviors in community where cells interact with a surface or with another cell. Bacterial amyloid, like all functional amyloid, share biochemical and structural properties associated with disease-associated eukaryotic amyloids such as Alzheimer's, Parkinson's, Diabetes Type II, among others. In vivo, at least six proteins encoded by the divergently transcribed csgDEFG csgBA operons, are dedicated to curli formation in E. coli. The csgBA operon encodes the major structural subunit, CsgA, and the nucleator protein CsgB. However, this work showed that it is possible to obtain curli fibers from the in vitro polymerization of CsgA protein in the absence of other proteins involved in the biogenesis of curli. In vivo CsgA protein was produced by two recombinant strains of E. coli that were genetically engineered to express such CsgA intracellular and extracellular in order to compare the formation of curli fiber under different expressión conditions. The purification of this protein was performed by immobilized metal affinity chromatography (IMAC). We verified the results of the in vitro amyloid structures obtained using fluorescence spectroscopy analysis, taking advantage of the staining characteristics of amyloid fibers, and it was observed the formation of a lattice strain, morphologically similar to the fabric forming in vivo bacterial biofilms, given by CsgA protein polymerization obtained extracellularly. In opposition to this, it was observed that the protein obtained from the intracellular medium CsgA, formed amorphous and disordered structures which prevented the formation of curli fibers.
dc.description.degreelevelPregrado
dc.description.degreenameQuímico
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.identifier.instnameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.reponameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.repourlhttps://noesis.uis.edu.co
dc.identifier.urihttps://noesis.uis.edu.co/handle/20.500.14071/29423
dc.language.isospa
dc.publisherUniversidad Industrial de Santander
dc.publisher.facultyFacultad de Ciencias
dc.publisher.programQuímica
dc.publisher.schoolEscuela de Química
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)
dc.rights.licenseAttribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0
dc.subjectEscherichia Coli
dc.subjectFibras Curli
dc.subjectAmiloides
dc.subjectProteínas Recombinantes
dc.subjectPurificación Imac
dc.subjectTioflavina T.
dc.subject.keywordEscherichia Coli
dc.subject.keywordCurli Fibers
dc.subject.keywordRecombinant Proteins
dc.subject.keywordImac Purification
dc.subject.keywordThioflavin T.
dc.titleEstudio de la expresión de la proteína csga principal componente proteico de las fibras curli en cepas recombinantes de escherichia coli
dc.title.englishStudy of protein expressión csga, major protein component curli fiber in recombinant strains of escherichia coli.
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bcce
dc.type.hasversionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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