Evaluación del mecanismo de muerte celular inducido por una proteína de fusión recombinante generada a partir de los genes de las proteínas b13r y tk del virus del herpes simple, en líneas celulares tratadas con ganciclovir

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dc.contributor.advisorArteaga, Herman Jose
dc.contributor.advisorCardona, Maria Eugenia
dc.contributor.authorBetancourt Villamizar, Eddy Carolina
dc.date.accessioned2024-03-03T19:38:49Z
dc.date.available2012
dc.date.available2024-03-03T19:38:49Z
dc.date.created2012
dc.date.issued2012
dc.description.abstractEn el área de la terapia génica antitumoral se han propuesto diferentes alternativas. El método GDEPT parece ser una alternativa bastante promisoria. Para la GDEPT se han explorado diversas combinaciones de enzimas y pro-fármacos. La combinación HSV/Tk y GCV, ha sido el sistema más investigado. En este sistema, la muerte celular es inducida por el GCV al ser fosforilado por HSV/TKk e inhibir la síntesis de DNA y desencadenar apoptosis. En los tratamientos antitumorales es deseable que la muerte celular se asocie a la inducción de una fuerte respuesta inmune antitumoral. Aunque Tk/GCV permite la ablación de un número considerable de células tumorales, la apoptósis es poco inmunogénica. Nosotros creemos que modificando el mecanismo de muerte celular en Tk/GCV se podría mejorar su inmunogenicidad y eficiencia. Hemos propuesto adicionar a este sistema, la proteína inhibidora de caspasas B13R y hemos diseñado y construído una proteína recombinante de fusión, constituida por B13R del VV, fusionada con Tk y GFP. La evaluación de Tk/GCV en presencia de B13R en células HEK-293T, mostró que, en este sistema, la muerte celular ocurre mediante un mecanismo diferente a la apoptosis, caracterizada por: diferencias morfológicas, baja actividad de caspasas, compromiso del potencial de membrana de membrana mitocondrial por disminución con respecto al proceso clásico de apoptosis, expresión de fosfatidil serina en la membrana y pérdida de la integridad de la membrana plasmática. Considerando la función de B13R como inhibidor de caspasas y su efecto a estímulos apoptóticos irreversibles, es posible sugerir que este tipo de muerte celular pudiera ser una de las formas de necrosis programada. Este sistema pudiera utilizarse para estudios del efecto de las formas de muerte celular sobre el sistema inmune y especialmente, su respuesta ante las diferentes formas de muerte de células tumorales y su posible aplicación como método alternativo de GDEPT.
dc.description.abstractenglishIn the field of antitumoral gene therapy different approaches have been proposed. GEDPT seems to be a very promising alternative. For GDEPT various combinations of enzymes and pro-drugs have been explored. HSV/Tk and GCV has been the most extensibly investigated combination. In this method, cell death is induced by GCV which, when phosphorylated by the HSVTKk, inhibits the DNA synthesis and triggers apoptosis. In all cancer treatments it is desirable that the tumor cell death could lead to induction of strong immune response against tumors. Although Tk/GCV system enables the ablation of a substantial number of tumor cells, apoptotic cell death is poorly immunogenic. We believe that by modifying the mechanism of cell death in TK/GCV could improve its immunogenicity and efficiency. We have proposed to add to this system, the caspase inhibitor protein B13R. For that, we have designed and constructed a vector that expresses the DNA sequence encoding the recombinant fusion protein, comprising B13R VV, with the HSV/Tk and GFP. The evaluation of the Tk/GCV in the presence of B13R in HEK-293T cells, showed that, in this model, cell death occurs by a different mechanism to apoptosis, characterized by: morphological differences, low caspase activity, decreased MMP with respect to the classical process of apoptosis, expression of phosphatidylserine on the outside of the plasma membrane and loss of the plasma membrane integrity. Considering the role of the caspase inhibitor B13R on the effect of an irreversible apoptotic stimuli, it is possible to suggest that this type of cell death could be one of the programmed necrosis forms. HSVTk-B13R/GCV could be used for studies of the effect of different forms of cell death on the immune system and, particularly the kind of response to various forms of tumor cell death and its possible application as an alternative method of GDEPT.
dc.description.degreelevelMaestría
dc.description.degreenameMagíster en Ciencias Básicas Biomédicas
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.identifier.instnameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.reponameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.repourlhttps://noesis.uis.edu.co
dc.identifier.urihttps://noesis.uis.edu.co/handle/20.500.14071/27654
dc.language.isospa
dc.publisherUniversidad Industrial de Santander
dc.publisher.facultyFacultad de Salud
dc.publisher.programMaestría en Ciencias Básicas Biomédicas
dc.publisher.schoolEscuela de Bacteriología y Laboratorio Clínico
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)
dc.rights.licenseAttribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0
dc.subjectHSVTk/GCV
dc.subjectGDEPT
dc.subjectSPI-2
dc.subjectProteína fusión reportera GFP
dc.subjectMuerte celular
dc.subject.keywordHSVTk/GCV
dc.subject.keywordGDEPT
dc.subject.keywordSPI-2
dc.subject.keywordFusion reporter protein B13R-GFP
dc.subject.keywordCell death
dc.titleEvaluación del mecanismo de muerte celular inducido por una proteína de fusión recombinante generada a partir de los genes de las proteínas b13r y tk del virus del herpes simple, en líneas celulares tratadas con ganciclovir
dc.title.englishEvaluation of the mechanism of cell death induced by a recombinant fusion protein generated from genes of the proteins b13r and herpes simplex virus tk, in cell lines treated with ganciclovir
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bcce
dc.type.hasversionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdcc
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestria
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