Producción heteróloga y determinación de la actividad hidrolasa de p-nitrofenil-palmitato (p-npp), de la lipasa lipb de amycolatopsis sp. atcc 39116
No Thumbnail Available
Date
2020
Authors
Evaluators
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad Industrial de Santander
Abstract
Las lipasas microbianas son muy apetecidas en la industria por su gran potencial biotecnológico. Su uso se ve limitado por los costos de producción e importación, por lo cual, se está a la búsqueda de una producción local de lipasas, especialmente en modelos de expresión bacterianos. Anteriormente, en el CINBIN se adelantó la caracterización bioinformática de una secuencia de lipasa potencial de Amycolatopsis sp., con características estructurales y funcionales similares a CalB de Candida antarctica, un referente en la industria. No obstante, no se sabe nada sobre su actividad enzimática in vitro. En este trabajo de grado, se expresó el gen LipB de Amycolatopsis sp. en Escherichia coli y se demostró la capacidad de la enzima Amyco_LipB para hidrolizar ésteres de cadena larga. Inicialmente, se diseñó un gen LipB compatible con el sistema de expresión de E. coli, basados en la secuencia proteica alojada en Genbank. Posteriormente, el gen LipB sintético se expresó en E. coli con el vector pET-22b. Se encontró que la enzima recombinante Amyco_LipB se expresa en cantidad suficiente para pruebas de actividad con extractos crudos, pero es insoluble y
Description
Keywords
Lipasa, Amycolatopsis sp, Actividad enzimática, Hidrolisis, Solubilidad.