Desarrollo de un biosensor óptico a partir de sistemas metálicos nanoestructurados para la detección in vitro de leishmaniasis

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dc.contributor.advisorMejía Ospino, Enrique
dc.contributor.advisorCastillo León, John Jairo
dc.contributor.advisorCabanzo Hernández, Rafael
dc.contributor.authorPrada Vargas, Yuly Andrea
dc.contributor.evaluatorGuzmán Quimbayo, Fanny
dc.contributor.evaluatorMontagut Ferizzola, Yeison Javier
dc.contributor.evaluatorMéndez S., Stelia Carolina
dc.contributor.evaluatorCombariza Montañez, Marianny Yajaira
dc.contributor.evaluatorRíos Angarita, Fabián Alirio
dc.date.accessioned2022-04-01T05:33:42Z
dc.date.available2022-04-01T05:33:42Z
dc.date.created2021
dc.date.issued2021
dc.description.abstractEstudios recientes han demostrado que la nanoestructura de oro de tamaño subnanométrico (0,5-2 nm) exhibe propiedades fotoluminiscentes resultantes del confinamiento cuántico de electrones distribuidos en superficies. Estas propiedades son el resultado de finas agregaciones de átomos de oro protegidos con biomoléculas como proteínas, cadenas de ADN y péptidos ricos en residuos de cisteína. Curiosamente, diseñamos péptidos homólogos al dominio conservador de lectinas, que puede reconocer glicoconjugados de Leishmania. Los péptidos se sintetizaron mediante síntesis en fase sólida múltiple utilizando la metodología del grupo fmoc en medio ácido. Finalmente, el péptido se purificó mediante HPLC. La masa molecular de este péptido fue confirmada por MALDI-TOF y para verificar la estructura de la α-hélice usamos dicroísmo circular. En este trabajo, describimos un método de sonicación fácil y rápido para la síntesis de AuNC con 3.0 nm de tamaño hidrodinámico y fotoemisión a 635 nm utilizando el péptido sintético PepHLec2854 como plantilla. Las interacciones entre el péptido y los nanoclusters de oro se confirmaron mediante fotoemisión de rayos X y espectroscopía Raman. En particular, a partir de los espectros ultrafinos que se muestran en el análisis MALDI-TOF. Finalmente, evaluamos el AuNC@PepHLec2854 como un biosensor óptico basado en espectroscopia de fluorescencia y la señal de fluorescencia de sAP y PPG. Observamos el aumento de la fluorescencia en presencia de sAP proporcional a la concentración. Esto puede sugerir que existe una fuerte interacción entre sAP y AuNC@PephLec2854, por lo tanto, el aumento de la intensidad de la fluorescencia puede estar relacionado con el mecanismo de asociación que tiene lugar cuando la molécula diana es detectada por AuNC@PepHLec2854. Este estudio es el primer paso hacia la fabricación de un biosensor óptico basado en AuNC funcionalizados con péptidos sintéticos para detectar biomoléculas como la fosfatasa ácida y los proteofosfoglicanos que son secretados por los parásitos Leishmania.
dc.description.abstractenglishRecent studies have shown that sub-nanometric (0.5-2 nm) size gold nanostructure exhibits photoluminescent properties resulting from the quantum confinement of electrons distributed on surfaces. Such properties are the result of fine aggregations of gold atoms protected with biomolecules such as proteins, DNA strands, and peptides rich in cysteine residues. Interestingly, we design peptides homologous to the conservative domain of lectins, which can recognize glycoconjugates from Leishmania. Peptides were synthesized by multiple solid-phase syntheses using fmoc group methodology in an acid medium. Finally, the peptide was purified by HPLC. The molecular mass of this peptide was confirmed by MALDI-TOF and to verify the α-helix structure we use Circular Dichroism. In this work, we described an easy and fast sonication method for the synthesis of AuNC with 3.0 nm of hydrodynamic size and photoemission at 638 nm using the synthetic peptide PepHLec2854 as a template. Interactions between the peptide and gold nanoclusters were confirmed by X-ray Photoemission and Raman Spectroscopy. Notably, from the ultrafine spectra shown in the MALDI-TOF analysis. Finally, we evaluated the AuNC@PepHLec2854 as an optical biosensor based on fluorescence spectroscopy and the fluorescence signal of sAP and PPG. We observed the enhanced fluorescence in presence of sAP proportional to the concentration. This can suggest that there is a strong interaction between sAP and AuNC@PepHLec2854, therefore, the increase of the fluorescence intensity can be related to the association mechanism that takes place when the target molecule is sensing by the AuNC@PepHLec2854. This study is the first step towards the fabrication of an optical biosensor based on AuNC functionalized with synthetic peptides for sensing biomolecules such as acid phosphatase and proteophosphoglycans which are secreted in abundance by parasites Leishmania.
dc.description.cvlachttps://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0001462808
dc.description.degreelevelDoctorado
dc.description.degreenameDoctor en Química
dc.description.orcidhttps://orcid.org/0000-0003-2873-7103
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.identifier.instnameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.reponameUniversidad Industrial de Santander
dc.identifier.repourlhttps://noesis.uis.edu.co
dc.identifier.urihttps://noesis.uis.edu.co/handle/20.500.14071/9672
dc.language.isospa
dc.publisherUniversidad Industrial de Santander
dc.publisher.facultyFacultad de Ciencias
dc.publisher.programDoctorado en Química
dc.publisher.schoolEscuela de Química
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.coarhttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2
dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)
dc.rights.licenseAttribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectBiosensores
dc.subjectNanoclusters de Oro
dc.subjectPéptidos
dc.subjectFosfatasa Ácida
dc.subjectProteofosfoglicano
dc.subjectLeishmaniasis
dc.subject.keywordBiosensors
dc.subject.keywordGold Nanoclusters
dc.subject.keywordPeptides
dc.subject.keywordAcid Fosfatase
dc.subject.keywordProteophosphoglycans
dc.subject.keywordLeishmaniasis
dc.titleDesarrollo de un biosensor óptico a partir de sistemas metálicos nanoestructurados para la detección in vitro de leishmaniasis
dc.title.englishDevelopment of an Optical Biosensor based on Nanostructured Metal Systems for the in vitro Detection of Leishmaniasis
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06
dc.type.hasversionhttp://purl.org/coar/version/c_b1a7d7d4d402bcce
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Doctorado
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