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Evaluación del mecanismo de muerte celular inducido por una proteína de fusión recombinante generada a partir de los genes de las proteínas b13r y tk del virus del herpes simple, en líneas celulares tratadas con ganciclovir

Resumen

En el área de la terapia génica antitumoral se han propuesto diferentes alternativas. El método GDEPT parece ser una alternativa bastante promisoria. Para la GDEPT se han explorado diversas combinaciones de enzimas y pro-fármacos. La combinación HSV/Tk y GCV, ha sido el sistema más investigado. En este sistema, la muerte celular es inducida por el GCV al ser fosforilado por HSV/TKk e inhibir la síntesis de DNA y desencadenar apoptosis. En los tratamientos antitumorales es deseable que la muerte celular se asocie a la inducción de una fuerte respuesta inmune antitumoral. Aunque Tk/GCV permite la ablación de un número considerable de células tumorales, la apoptósis es poco inmunogénica. Nosotros creemos que modificando el mecanismo de muerte celular en Tk/GCV se podría mejorar su inmunogenicidad y eficiencia. Hemos propuesto adicionar a este sistema, la proteína inhibidora de caspasas B13R y hemos diseñado y construído una proteína recombinante de fusión, constituida por B13R del VV, fusionada con Tk y GFP. La evaluación de Tk/GCV en presencia de B13R en células HEK-293T, mostró que, en este sistema, la muerte celular ocurre mediante un mecanismo diferente a la apoptosis, caracterizada por: diferencias morfológicas, baja actividad de caspasas, compromiso del potencial de membrana de membrana mitocondrial por disminución con respecto al proceso clásico de apoptosis, expresión de fosfatidil serina en la membrana y pérdida de la integridad de la membrana plasmática. Considerando la función de B13R como inhibidor de caspasas y su efecto a estímulos apoptóticos irreversibles, es posible sugerir que este tipo de muerte celular pudiera ser una de las formas de necrosis programada. Este sistema pudiera utilizarse para estudios del efecto de las formas de muerte celular sobre el sistema inmune y especialmente, su respuesta ante las diferentes formas de muerte de células tumorales y su posible aplicación como método alternativo de GDEPT.