Implementación de una metodología "top down" para identificar proteínas intactas mediante espectrometría de masas maldi-tof y decaimiento en la fuente (malhsd)
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Date
2013
Authors
Nova Guaracao, Lucia Cristina
Advisors
Evaluators
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Publisher
Universidad Industrial de Santander
Abstract
Con el fin de implementar la metodología TOP DOWN, para el análisis de proteínas intactas por medio de espectrometría de masas MALDI-ISD; se realizaron pruebas preliminares para establecer un protocolo óptimo de preparación de muestras. Utilizando albúmina sérica bovina (BSA) como patrón, se probaron dos matrices: ácido 2,5 dihidroxibenzóico (DHB) y ácido sinapínico (SA), las cuáles se aplicaron con los métodos de preparación drieddropletydoublelayer. Se observó que la matriz más adecuada para este tipo de análisis fue DHB, por su mayor efectividad para producir fragmentación en la estructura primaria de las proteínas, y se aplicó siguiendo el método de preparación drieddroplet. También se observó que el método de preparación, así como la matriz, son de gran importancia en este tipo de análisis, pues tienen un marcado efecto sobre la aparición de las señales ISD y en la resolución de las mismas; factores de gran importancia para la identificación de la proteína en estudio. Por medio de un análisis espectral, para establecer los parámetros instrumentales más adecuados, se pudo establecer como fluencia óptima para este estudio un valor del 60% de la fluencia total del laser. Además se observó una relación directamente proporcional entre este parámetro y la cantidad de señales, la intensidad, la relación señal/ruido (S/R) y la resolución de las mismas. Finalmente, se establecieron los pasos, desde preparación de muestras hasta identificación, para analizar proteínas intactas por espectrometría de masas MALDI-ISD.
Description
Keywords
Top Down, Maldi, Espectrometría De Masas, Proteínas Intactas, Fragmentación, Decaimiento En La Fuente.