Estudio de la expresión de la proteína csga principal componente proteico de las fibras curli en cepas recombinantes de escherichia coli
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Date
2013
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Publisher
Universidad Industrial de Santander
Abstract
Muchas enterobacteriáceas como E. coli pueden ensamblar fibras amiloides funcionales en su superficie celular. La mayoría de los amiloides bacterianos contribuyen a la formación de biopelículas y otros comportamientos en comunidad donde las células interactúan con una superficie o con otra célula. Los amiloides bacterianos, como todos los amiloides funcionales, comparten propiedades bioquímicas y estructurales con los amiloides eucarióticos asociados a enfermedades como Alzheimer, Parkinson, Diabetes tipo II, entre otras. In vivo, al menos seis proteínas, codificadas por los operones divergentes transcritos csgBA y csgDEFG, se dedican a la formación de curli en E. coli. El operón csgBA codifica la principal subunidad estructural, CsgA y la proteína nucleadora CsgB. Sin embargo, el desarrolló de este trabajó demostró que es posible obtener fibras curli obtenidas a partir de la polimerización in vitro de la proteína CsgA, en ausencia de las demás proteínas involucradas en la biogénesis curli. Aquí, la proteína CsgA fue producida in vivo, por dos cepas recombinantes de E. coli que fueron diseñadas genéticamente para expresar CsgA de forma intracelular y extracelular, a fin de comparar la formación de fibras curli bajo diferentes condiciones de expresión. La purificación de esta proteína se realizó mediante cromatografía de afinidad con ión metálico inmovilizado (IMAC). Se verificó la obtención in vitro de estructuras amiloides mediante análisis por espectroscopia de fluorescencia, aprovechando las características tintoriales de las fibras de tipo amiloide, y se observó la formación de un entramado fibrilar morfológicamente similar al entramado que forma las biopelículas bacterianas in vivo, dado por la polimerización de la proteína CsgA obtenida extracelularmente. Por el contrario, se observó que la proteína CsgA obtenida del medio intracelular, formó estructuras desordenadas y amorfas que impidieron la formación de fibras curli.
Description
Keywords
Escherichia Coli, Fibras Curli, Amiloides, Proteínas Recombinantes, Purificación Imac, Tioflavina T.