Evaluación in vitro del efecto de la inhibición del oncogen evi1 en un modelo murino de lma-evi1+
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Date
2012
Authors
Evaluators
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Publisher
Universidad Industrial de Santander
Abstract
La sobre-expresión de EVI1 es un indicador de mal pronóstico en leucemia mieloide aguda (LMAEVI1+ ). EVI1 es un factor de transcripción, esencial para el mantenimiento de las células madres hematopoyéticas y está involucrado en funciones leucogénicas. Se ha sugerido que EVI1 es un factor esencial, pero no suficiente para el desarrollo de LMA-Evi1+ . Recientemente, hemos desarrollado un modelo murino de LMA-Evi1+ , partiendo de una línea celular no trasplantable, dependiente de GM-CSF (DA-3 dep), con sobre-expresión de Evi1 como única lesión génica preleucémica. Esta línea es expandible en animales en condiciones de inflamación y la generación de una línea descendente independiente de factores de crecimiento (DA-3 ind) con fenotipo tumoral. Utilizando vectores de expresión constitutiva portadores de shRNA con secuencias de ARNi contra Evi1, de una eficiencia inhibitoria superior al 90%, evaluada en experimentos de cotransfección con plásmidos portadores del gen de fusión Evi1-d2GFP, hemos generado líneas celulares derivadas de las células DA-3 dep y DA-3 ind que expresan establemente ARNi contra Evi1. Estas líneas mostraron niveles de Evi1 de menos del 50% y patrones de proliferación no muy diferentes a las células parentales pero con sensibilidad al efecto citotóxico de clorofarabina significativamente incrementada. Estos datos en su conjunto, sugieren que en este modelo la inhibición de Evi1 niveles menores al 50% no afectan los mecanismos de proliferación, pero si incrementan la sensibilidad a la apoptosis celular. La recuperación de líneas modificadas establemente con secuencias que expresan siARN de alta eficiencia contra Evi1 y con niveles de expresión cercanos al 50% pudiera indicar que, en este tipo de células, niveles inferiores de Evi1 son letales. En resumen, estos resultados sugieren que Evi1 pudiera ser la causa de la resistencia al tratamiento de la LMA-EVI1+ y señalan a este oncogén como un posible blanco terapéutico.
Description
Keywords
EVI1, LMA, ARNi, DA-3