Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas

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Browsing Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas by browse.metadata.advisor "Cardona, Maria Eugenia"

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    Evaluación del mecanismo de muerte celular inducido por una proteína de fusión recombinante generada a partir de los genes de las proteínas b13r y tk del virus del herpes simple, en líneas celulares tratadas con ganciclovir
    (Universidad Industrial de Santander, 2012) Betancourt Villamizar, Eddy Carolina; Arteaga, Herman Jose; Cardona, Maria Eugenia
    En el área de la terapia génica antitumoral se han propuesto diferentes alternativas. El método GDEPT parece ser una alternativa bastante promisoria. Para la GDEPT se han explorado diversas combinaciones de enzimas y pro-fármacos. La combinación HSV/Tk y GCV, ha sido el sistema más investigado. En este sistema, la muerte celular es inducida por el GCV al ser fosforilado por HSV/TKk e inhibir la síntesis de DNA y desencadenar apoptosis. En los tratamientos antitumorales es deseable que la muerte celular se asocie a la inducción de una fuerte respuesta inmune antitumoral. Aunque Tk/GCV permite la ablación de un número considerable de células tumorales, la apoptósis es poco inmunogénica. Nosotros creemos que modificando el mecanismo de muerte celular en Tk/GCV se podría mejorar su inmunogenicidad y eficiencia. Hemos propuesto adicionar a este sistema, la proteína inhibidora de caspasas B13R y hemos diseñado y construído una proteína recombinante de fusión, constituida por B13R del VV, fusionada con Tk y GFP. La evaluación de Tk/GCV en presencia de B13R en células HEK-293T, mostró que, en este sistema, la muerte celular ocurre mediante un mecanismo diferente a la apoptosis, caracterizada por: diferencias morfológicas, baja actividad de caspasas, compromiso del potencial de membrana de membrana mitocondrial por disminución con respecto al proceso clásico de apoptosis, expresión de fosfatidil serina en la membrana y pérdida de la integridad de la membrana plasmática. Considerando la función de B13R como inhibidor de caspasas y su efecto a estímulos apoptóticos irreversibles, es posible sugerir que este tipo de muerte celular pudiera ser una de las formas de necrosis programada. Este sistema pudiera utilizarse para estudios del efecto de las formas de muerte celular sobre el sistema inmune y especialmente, su respuesta ante las diferentes formas de muerte de células tumorales y su posible aplicación como método alternativo de GDEPT.
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    Evaluación in vitro del efecto de la inhibición del oncogen evi1 en un modelo murino de lma-evi1+
    (Universidad Industrial de Santander, 2012) Silva Lara, Maria Fernanda; Arteaga Narváez, Herman Jose; Cardona, Maria Eugenia
    La sobre-expresión de EVI1 es un indicador de mal pronóstico en leucemia mieloide aguda (LMAEVI1+ ). EVI1 es un factor de transcripción, esencial para el mantenimiento de las células madres hematopoyéticas y está involucrado en funciones leucogénicas. Se ha sugerido que EVI1 es un factor esencial, pero no suficiente para el desarrollo de LMA-Evi1+ . Recientemente, hemos desarrollado un modelo murino de LMA-Evi1+ , partiendo de una línea celular no trasplantable, dependiente de GM-CSF (DA-3 dep), con sobre-expresión de Evi1 como única lesión génica preleucémica. Esta línea es expandible en animales en condiciones de inflamación y la generación de una línea descendente independiente de factores de crecimiento (DA-3 ind) con fenotipo tumoral. Utilizando vectores de expresión constitutiva portadores de shRNA con secuencias de ARNi contra Evi1, de una eficiencia inhibitoria superior al 90%, evaluada en experimentos de cotransfección con plásmidos portadores del gen de fusión Evi1-d2GFP, hemos generado líneas celulares derivadas de las células DA-3 dep y DA-3 ind que expresan establemente ARNi contra Evi1. Estas líneas mostraron niveles de Evi1 de menos del 50% y patrones de proliferación no muy diferentes a las células parentales pero con sensibilidad al efecto citotóxico de clorofarabina significativamente incrementada. Estos datos en su conjunto, sugieren que en este modelo la inhibición de Evi1 niveles menores al 50% no afectan los mecanismos de proliferación, pero si incrementan la sensibilidad a la apoptosis celular. La recuperación de líneas modificadas establemente con secuencias que expresan siARN de alta eficiencia contra Evi1 y con niveles de expresión cercanos al 50% pudiera indicar que, en este tipo de células, niveles inferiores de Evi1 son letales. En resumen, estos resultados sugieren que Evi1 pudiera ser la causa de la resistencia al tratamiento de la LMA-EVI1+ y señalan a este oncogén como un posible blanco terapéutico.